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大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒

大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒, , 结构式
大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒
CAS号:
英文名:
Rat Motilin,MTL ELISA Kit
英文别名:
Motilin ELISA Kit;Canine Motilin,MTL ELISA Kit
中文名:
大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒
中文别名:
犬 胃动素(MTL)ELISA试剂盒;大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒
CBNumber:
CB25528480
分子式:
分子量:
0
MOL File:
Mol file

大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒化学性质

安全信息

大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒性质、用途与生产工艺

简介

大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒采用双抗体夹心法:抗大鼠胃动素(MTL)单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的胃动素(MTL)会与单抗结合,游离的成份被洗去。加入酶标抗体,抗大鼠胃动素(MTL)抗体与结合在单抗上的大鼠胃动素(MTL)结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物,若反应孔中有胃动素(MTL),辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色,加终止液变黄。在450nm处测OD值,胃动素(MTL)浓度与OD450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线求出标本中的胃动素(MTL)浓度。

用途

大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中的胃动素(MTL)含量。

检测原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定大鼠标本中胃动素(MTL)水平。用纯化的胃动素(MTL)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入胃动素(MTL),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃动素(MTL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中胃动素(MTL)含量。  

样本

1、组织标本 对于样本要求保持鲜重,称取样本中的重量不小于50mg,一般以1g为基准,但不严格要求固定样本每个重量必须达到相同的水平。匀浆的比例选取10%,相当于1g组织加9ml的匀浆液来进行匀浆。匀浆液选取PBS(PH=7.2-7.4,浓度为0.01mol/L)。匀浆过程选用组织匀浆器,冰浴上匀浆。(或者进行液氮碾磨),离心取上清,离心转速选用5000转每分,时间是15分钟。取上清液待检。 2-1、贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5分钟后收集细胞;悬浮细 胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS 洗涤3次。每 1×106 个细胞中加入150-200μL PBS重悬并通过反 复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少PBS的体积)。将提取液于1500×g离心10分钟,取上清检测。 2-2超声波破碎条件:用20kHz频率,150W的功率,在冰浴中进行超声波破碎,每破碎2s,间隔3s,反复破碎三次。 2-3反复冻融:收集细胞悬液,4℃低温离心(3000rpm,5min),弃上清,加入一定量PBS(200ul),轻轻吹打混匀,-20℃ 冷冻30 min,37℃解冻,如此反复3次,可形成细胞裂解液。 3、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融. 4、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。  

操作步骤

1. 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。 4. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 7. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。 8. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 9. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值),测定应在加终止液后15分钟以内进行。    

大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒 上下游产品信息

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