背景及概述
Ankycorbin是一种含有ankyrin重复和卷曲结构域的蛋白，由RAI14基因编码。它在多种组织中表达，并被认为在肌动蛋白调节外胚层特化、建立精子极性和精子粘附中发挥作用。它还可能促进血睾丸屏障的Sertoli细胞紧密连接的完整性。它的预测重量为110.0 kDal，等电点为5.87。它的核苷酸914-978之间有富含谷氨酰胺的区域，其他方面富含荔枝碱、谷氨酸和丝氨酸，而甘氨酸和苯丙氨酸含量较少。它有四种不同的异构体（A、B、C和D），大多数异构体含有一个或多个剪接变体，主要在5'UTR上有所不同。人ANKYCORBIN锚定蛋白(RAI14)ELISA检测试剂盒是一个用于在复杂生物样本（如血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆等）中精确定量人 RAI14 蛋白含量的专用实验工具。
图1 人ANKYCORBIN锚定蛋白(RAI14)ELISA检测标准曲线示意图
工作原理
夹心法 ELISA 是检测抗原最常用、最特异的方法，人ANKYCORBIN锚定蛋白(RAI14)ELISA检测试剂盒操作基本步骤如下：
包被： 一个96孔板的孔内壁预先包被了一种捕获抗体，这种抗体能特异性地识别并结合RAI14蛋白的一个位点。
加样： 将您的样本（或已知浓度的标准品）加入到孔中。如果样本中含有RAI14蛋白，它就会被捕获抗体“抓住”并固定在孔壁上。
洗涤： 洗去孔中所有未结合的成分。
加检测抗体： 加入另一种检测抗体，这种抗体能识别RAI14蛋白的另一个位点（与捕获抗体识别的位点不同）。它也会与已被固定的RAI14结合，形成“抗体-抗原-抗体”的“三明治”复合物。
洗涤： 再次洗涤，洗去未结合的检测抗体。
加酶标二抗： 加入一种带有酶（如HRP辣根过氧化物酶）标记的二抗，该二抗能特异性地结合检测抗体。
洗涤： 最后一次洗涤，洗去所有未结合的酶标二抗。此时，孔中酶的量与样本中RAI14的量成正比。
加底物： 加入酶的显色底物（如TMB）。酶会催化底物发生反应，产生有颜色的产物。
终止反应： 加入终止液（如硫酸）停止反应，此时液体的颜色会从蓝色变为黄色。
检测： 使用酶标仪在特定波长（如450nm）下测量每个孔的光密度（OD值）。颜色越深，OD值越高，表示样本中RAI14的浓度越高。
通过测量标准品的OD值并绘制标准曲线，就可以精确计算出未知样本中RAI14的实际浓度。
参考文献
[1]The dual-crosslinked prospective values of RAI14 for the diagnosis and chemosurveillance in triple negative breast cancer.[J]Annals of Medicine. 2023
DOI: 10.1080/07853890.2023.2177722