人弹性蛋白(ELN)ELISA KIT

人弹性蛋白(ELN)ELISA KIT采用定量夹心酶免疫测定技术。对ELN特异的抗体已预先包被在微板上。将标准品和样品吸取到孔中，并且存在的任何ELN都被固定的抗体结合。除去任何未结合的物质后，将对ELN特异的生物素偶联抗体添加到孔中。洗涤后，将抗生物素蛋白缀合的辣根过氧化物酶（HRP）加入孔中。洗涤以除去任何未结合的抗生物素蛋白-酶试剂后，将底物溶液添加至孔中，并且颜色与初始步骤中结合的ELN的量成比例。停止显色并测量颜色的强度。结果计算：将每个标准品和样品的重复读数取平均值，然后减去平均零标准品光密度。通过使用能够生成四参数对数（4-PL）曲线拟合的计算机软件来减少数据来创建标准曲线。或者，通过在x轴上绘制每种标准品的平均吸光度对y轴上的浓度绘制标准曲线，并通过图中的点绘制最佳拟合曲线。可以通过绘制ELN浓度的对数与OD的对数来线性化数据，并且可以通过回归分析确定最佳拟合线。此过程将产生足够但不太精确的数据拟合。如果样品已稀释，将浓度从标准曲线上读出必须由稀释因子相乘。

人弹性蛋白(ELN)ELISA KIT用于弹性蛋白及其代谢通路相关基因SNPs及单体型与长沙汉族人群脑出血的关系研究。

本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中弹性蛋白(ELN)的含量。本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人弹性蛋白(ELN)水平。用纯化的弹性蛋白(ELN)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入弹性蛋白(ELN)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的弹性蛋白(ELN)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中弹性蛋白(ELN)含量。1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。