NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)

NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后，不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞，并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性，吞噬酵母多糖和铜绿，非特异性脂酶活性，Fc受体，氧化降解；分泌IL-1,TNFbeta和IL-6，可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素，分泌TGFbeta前体。在博莱霉素刺激下，TGFbetamRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生达50%。即使达到0.001mg/mL的水平，LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源，可以用于体外研究巨响细胞相关活性，此细胞悬浮-贴壁混合生长。

NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)

NR8383细胞来源于正常成年SD大鼠肺灌洗时的肺泡巨噬细胞，再通过有限稀释从单个细胞亚克隆，最后从软琼脂亚克隆三次建立。NR8383细胞在Gerbil肺细胞连续培养液里培养了8-9个月后，不再需要外源生长因子。NR8383细胞表现出巨噬细胞的特性：吞噬酵母多糖和铜绿、非特异性脂酶活性、Fc受体、氧化降解；分泌IL-1、TNF-β和IL-6，可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素，分泌TNF-β前体，在博莱霉素刺激下，TNF-β mRNA表达也上升。NR8383细胞对内毒素敏感，1-10ng/mL的LPS抑制增殖达50%；即使达到10ng/mL的水平，LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞是一种高响应的均一来源肺泡巨噬细胞模型，可以用于体外研究巨噬细胞相关活性，此细胞悬浮-贴壁混合生长。肺；巨噬细胞；肺泡巨噬细胞样(圆形为主，悬浮或附着瓶底)NR8383来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后，不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞，并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性，吞噬酵母多糖和铜绿，非特异性脂酶活性，Fc受体，氧化降解；分泌IL-1, TNF beta和IL-6，可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素，分泌TGF beta前体。在博莱霉素刺激下，TGF beta mRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生达50%。 即使达到0.001mg/mL的水平，LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。 NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源，可以用于体外研究巨响细胞相关活性。1.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清；2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；3.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。也可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。

贴壁和悬浮混合；巨噬细胞巨噬细胞；自发永生；SD大鼠；成年NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。悬浮细胞