人CXC趋化因子受体3(CXCR3)Elisa试剂盒
| 中文名称 | 人CXC趋化因子受体3(CXCR3)Elisa试剂盒 |
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| 中文同义词 | 人CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA试剂盒 |
| 英文名称 | Human CXC-chemokine receptor 3,CXCR3 ELISA Kit |
| 英文同义词 | Human CXCR3(CXC-Chemokine Receptor 3) ELISA Kit |
| CAS号 | |
| 分子式 | |
| 分子量 | 0 |
| EINECS号 | |
| 相关类别 | |
| Mol文件 | Mol File |
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人CXC趋化因子受体3(CXCR3)Elisa试剂盒 性质
人CXC趋化因子受体3(CXCR3)Elisa试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中CXC趋化因子受体3(CXCR3)含量。
用纯化抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗体，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。趋化因子受体CXCR3由三种IFN-γ诱导配体CXCL9、CXCL10和CXCL11激活诱导。它是一种七次跨膜的G蛋白偶联受体，编码368个氨基酸。根据受体氨基末端的组成，CXCR3可分为三种剪接变体：CXCR3-A、CXCR3-B和截短变体CXCR3-alt。CXCR3-A和CXCR3-B的配体是CXCL9、CXCL10和CXCL11，而CXCR3-alt仅与CXCL11结合。 其中，CXCR3-A和CXCR3-B是研究最多的两种异构体。
CXCR3-A主要在活化的T淋巴细胞和自然杀伤（NK）细胞中表达，CXCR3-B主要分布在血管内皮细胞上，而对CXCR3-alt的研究相对较少，目前认为其主要与干扰素诱导的T细胞α趋化剂（I-TAC）联合发挥生物学作用。
CXCR3的免疫治疗主要包括拮抗剂和激动剂，其中抑制剂包括AMG487和TAK-779，激动剂包括PS372424。CXCR3在影响肿瘤进展和微环境方面发挥着双重作用，当免疫疗法用于不同的肿瘤时，其效果有所不同。
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人CXC趋化因子受体3(CXCR3)水平。用纯化的CXC趋化因子受体3(CXCR3)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入CXC趋化因子受体3(CXCR3)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CXC趋化因子受体3(CXCR3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中CXC趋化因子受体3(CXCR3)含量。1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。