人血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA KIT

双抗体夹心法人本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人VCAM-1/CD106抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的人VCAM-1/CD106会与包被抗体结合。后依次加入生物素化的抗人VCAM-1/CD106抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗人VCAM-1/CD106抗体与结合在包被抗体上的人VCAM-1/CD106结合，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测OD值，VCAM-1/CD106浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中VCAM-1/CD106的浓度。可检测样本中人的VCAM-1，且与其类似物无明显交叉反应。本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)的含量。1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.  8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。血管细胞粘附蛋白1也被称为血管内皮细胞粘附分子1（VCAM-1）或分化簇106（CD106），由VCAM1基因编码的蛋白质，它作为一种细胞粘附分子发挥作用。VCAM-1是免疫球蛋白超家族的成员，该超家族的蛋白质包括抗体和T细胞受体。VCAM-1基因包含六个或七个免疫球蛋白结构域，只有在内皮细胞受到细胞因子的刺激后才会在大、小血管上表达。它交替剪接成两个已知的RNA转录本，在人类中编码不同的异构体。