小鼠睾丸间质细胞

小鼠睾丸间质细胞是取自小鼠睾丸间质的上皮细胞样贴壁细胞，小鼠睾丸间质细胞在LH作用下cAMP产量升高，但对促卵泡激素没有响应。小鼠睾丸间质细胞对LH的响应持续时间与血清批次有关；在LH存在下，小鼠睾丸间质细胞可以代谢胆固醇。生长培养基：DMEM/F12＋5%HS＋2.5%FBS＋1%P/S，培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%，温度：37℃。小鼠睾丸间质细胞分离自睾丸组织。睾丸间质细胞是睾丸中一种重要的细胞类型，主要位于曲精小管之间。胞体呈圆形、椭圆形或不规则形，胞体较大，直径约20μm。胞质呈嗜酸性，细胞核呈圆形或卵圆形，常位于中央，染色较淡，有1～2个核仁。线粒体多，呈管嵴状，无分泌颗粒。睾丸间质细胞的主要功能是分泌和合成睾丸酮（睾酮），这是一种重要的雄性激素。睾丸酮在刺激精子发生、精子成熟及性功能的维持等方面具有重要作用。从青春期开始，睾丸间质细胞受垂体前叶嗜碱性细胞分泌的间质细胞刺激素（黄体生成素）的作用，能合成并分泌雄性激素。睾丸间质细胞在生殖医学、内分泌学以及药物研发等领域具有重要的研究价值。例如，以睾丸支持细胞为靶向的药物研究备受关注，体外培养的睾丸支持细胞能直接反应药物对该细胞作用的特点。

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10S的培养基来终止消化。

3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

成纤维细胞样睾丸组织小鼠睾丸间质细胞采用胶原酶消化法制备而来。