1-[2-(4-甲基苯基)-5-叔丁基吡唑-3-基]-3-[4-(2-吗啉-4-基乙氧基)萘-1-基]脲

BIRB 796 (Doramapimod)是一种高度选择性的p38α MAPK抑制剂，K_d为0.1 nM，比作用于JNK2选择性高330倍，微弱抑制c-RAF， Fyn和Lck，也微弱抑制ERK-1， SYK， IKK2， ZAP-70， EGFR， HER2， PKA， PKC， PKCα/β/γ。BIRB 796作用于ERK-1,SYK,IKK2β,ZAP-70,EGFR激酶,HER2,蛋白激酶 A(PKA),PKC,PKC-α,PKC-β(I和II)和PKC-γ没有明显抑制效果。BIRB 796通过在吗啉氧和p38α的ATP结合域间形成氢键，显著提高亲和力。BIRB 796是作用于人类p38 MAPK的最有效和分离最慢的抑制剂之一。 BIRB 796 有效抑制c-Raf-1和Jnk2α2，IC50分别为1.4和0.1 nM。 高浓度BIRB796也抑制SAPK3/p38γ的活性和激活。BIRB796阻断压力诱导的框架蛋白SAP97磷酸化, SAP97是SAPK3/p38γ的底物。BIRB796作用于HEK293细胞，阻断JNK1/2激活和活性,而作用于Hela细胞，不抑制ERK1/ERK2激活和活性。而且, BIRB796与p38 MAPKs或JNK1/2的结合，降低上游激酶MKK6或MKK4磷酸化，而不增强去磷酸化。 BIRB 796 作用于TNF-α和TGF-β1引起的BMSCs，下调IL-6和VEGF分泌。 BIRB-796有吡唑环 ，使亲脂的末端异丁基基团 与低选择性位点结合，甲苯基环与高选择性位点结合。BIRB-796也抑制B-Raf和Abl，IC50分别为83 nM 和14.6 μM。BIRB 796按30 mg/kg剂量作用于LPS刺激的鼠，抑制TNF-α达84%。作用于患胶原诱导的关节炎鼠显示高效性。 BIRB 796口服处理给鼠，具有好的药物动力学特征。BIRB 796是第一个进入三期临床试验的p38 MAPK抑制剂。Doramapimod (BIRB 796)是一种泛p38 MAPK抑制剂，在无细胞试验中作用于p38α/β/γ/δ的IC50分别为38 nM，65 nM，200 nM 和520 nM，并且能够与p38α结合，在THP-1细胞中Kd为0.1 nM，比作用于JNK2选择性高330倍，对c-RAF，Fyn 和Lck具有较弱的抑制作用，对ERK-1，SYK，IKK2也有微弱抑制作用。

Target	Value
JNK2 ()
c-RAF ()
Fyn ()
p38α (Cell-free assay)	0.1 nM(Kd)
p38α ()	38 nM

BIRB 796作用于ERK-1,SYK,IKK2β,ZAP-70,EGFR激酶,HER2,蛋白激酶 A(PKA),PKC,PKC-α,PKC-β(I和II)和PKC-γ没有明显抑制效果。BIRB 796通过在吗啉氧和p38α的ATP结合域间形成氢键，显著提高亲和力。BIRB 796是作用于人类p38 MAPK的最有效和分离最慢的抑制剂之一。 BIRB 796 有效抑制c-Raf-1和Jnk2α2，IC50分别为1.4和0.1 nM。 高浓度BIRB796也抑制SAPK3/p38γ的活性和激活。BIRB796阻断压力诱导的框架蛋白SAP97磷酸化, SAP97是SAPK3/p38γ的底物。BIRB796作用于HEK293细胞，阻断JNK1/2激活和活性,而作用于Hela细胞，不抑制ERK1/ERK2激活和活性。而且, BIRB796与p38 MAPKs或JNK1/2的结合，降低上游激酶MKK6或MKK4磷酸化，而不增强去磷酸化。 BIRB 796 作用于TNF-α和TGF-β1引起的BMSCs，下调IL-6和VEGF分泌。 BIRB-796有吡唑环 ，使亲脂的末端异丁基基团 与低选择性位点结合，甲苯基环与高选择性位点结合。BIRB-796也抑制B-Raf和Abl，IC50分别为83 nM 和14.6 μM。

BIRB 796按30 mg/kg剂量作用于LPS刺激的鼠，抑制TNF-α达84%。作用于患胶原诱导的关节炎鼠显示高效性。 BIRB 796口服处理给鼠，具有好的药物动力学特征。

第四步合成1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(4-(2-吗啉代乙氧基)萘-1-基)脲（化合物4）：向4-(2-((4-硝基萘-1-基)氧基)乙基)吗啉（11.18g，36.9mmol）在甲醇（90mL）和THF（30mL）中的混合溶液中，加入5％钯/活性炭（0.500g）。所得混合物在室温下于氢气氛中搅拌23小时。反应完成后，过滤除去不溶物，减压蒸发溶剂。将得到的残余物与2,2,2-三氯乙基(3-(叔丁基)-1-(对甲苯基)-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸酯（16.1g，39.7mmol）、N,N-二异丙基乙胺（8.50mL）和DMSO（30mL）混合，并在60℃下搅拌18小时。反应完成后，将反应溶液冷却至室温，加入饱和盐水。水层用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法（洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷=50/50至乙酸乙酯/甲醇=90/10）纯化所得残余物，得到13.58g目标产物1-(3-(叔丁基)-1-(对甲苯基)-1H-吡唑-5-基)-3-(4-(2-吗啉乙氧基)萘-1-基)脲，产率为69%。

参考文献：

[1] Patent: US2012/184735, 2012, A1. Location in patent: Page/Page column 37