CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS(CSFV)猪瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

猪瘟是一种急性、热性、高度接触性传染病，主要特征是高温、微血管变性而引起全身出血、坏死、梗塞，瘟疫细菌传染，对猪危害极为严重。猪瘟病毒是猪瘟的病原，危害猪和野猪，其他动物不发病。RT-PCR（逆转录聚合酶链式反应）是一种通过逆转录RNA生成cDNA，并利用PCR扩增cDNA的分子生物学技术，广泛应用于基因表达分析、病毒检测等领域。其核心特点是高灵敏度和特异性，能够将微量RNA样本转化为可检测的DNA产物。

在使用猪瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒时，可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。

1、液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。

2、固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。

3、粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

4、其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。