BCA蛋白定量试剂盒

BCA蛋白定量试剂盒基于二喹啉甲酸（Bicinchoninic acid，BCA）与铜离子的显色反应。在碱性条件下，蛋白质可将二价铜离子（Cu²⁺）还原为一价铜离子（Cu⁺），BCA与Cu⁺螯合形成紫蓝色复合物，该复合物在562nm处有强烈吸光性，吸光度与蛋白浓度在一定范围内呈良好线性关系，从而可通过测定吸光值来确定蛋白浓度。BCA蛋白定量试剂盒一般由BCA溶液、铜溶液和牛血清白蛋白（BSA）标准品组成。

灵敏度高：检测浓度下限可达10μg/ml-25μg/ml，最小检测蛋白量可低至0.2μg-0.5μg。

抗干扰性强：对去污剂等化学物质耐受性好，如可兼容样品中高达5%的SDS、Triton X-100、Tween-20、60、80。

线性范围广：在20μg/ml-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。

操作简便：一般45分钟内即可完成测定。

BCA蛋白测定法是在碱性环境下，通过蛋白将Cu2+还原为Cu1+，再通过二辛可宁酸(BCA)来检测亚铜阳离子(Cu1+)。第一步是铜与碱性环境中的蛋白质螯合，形成浅蓝色复合物，这一过程被称为双缩脲反应。在该反应（双缩脲反应）中，由三个或更多氨基酸残基的肽在含酒石酸钠钾的碱性环境中与铜离子形成有色螯合复合物。

在显色反应的第二步中，BCA与第一步形成的还原型（亚铜）阳离子发生反应。两分子BCA与一个亚铜离子螯合，产生深紫色反应产物。BCA/铜复合物是水溶性的，在562 nm处具有强线性吸收，且吸收度随蛋白质浓度增加而升高。该复合物的灵敏度（检测下限）大约是第一个反应中淡蓝色的100倍。

目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA蛋白定量试剂盒(BCAProteinAssaykit)和Braatord蛋白定量试剂盒(BradfordProteinAssayKit),BCA法与传统方法相比更简单、更稳定、更灵敏，BCA法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，对于5%以内的SDS、TritonX-100、Tween20、Tween80具有很好的兼容性，但BCA法测定蛋白浓度易受整合剂、高浓度的还原剂等的影响，在BCA法测定蛋白浓度前应尽量使：EDTA浓度≤1mM，2-ME≤0.01%。