大鼠视网膜微血管内皮细胞

大鼠视网膜微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞经CD31/vWF免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

大鼠视网膜微血管内皮细胞

糖尿病性视网膜病变、年龄相关性黄斑变性等视网膜疾病均与视网膜血管病理性改变密切相关。随着对视网膜血管性疾病的研究深入，发现视网膜血管内皮细胞是该病变的关键细胞。通过体外分离培养原代视网膜微血管内皮细胞获得大量纯度高的内皮细胞，可为视网膜血管性疾病研究提供可靠的体外模型收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1.取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2.收集瓶内培养基，每瓶细胞仅留8mL左右培养基继续培养，然后根据实验目的进行后续实验。

3.细胞传代

1)吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4)待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。
2)细胞鉴定：血小板-内皮细胞粘附分子（PECAM-1/CD31）或血管假性血友病因子（vWF）免疫荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5)细胞生长方式：呈鹅卵石样，不规则细胞，贴壁培养。1:2传代大鼠视网膜组织大鼠视网膜微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。贴壁生长呈鹅卵石样，不规则细胞样