人结直肠腺癌细胞

LS 174T是一种表现上皮形态的细胞，从一名58岁白人女性结直肠癌腺癌患者的结肠中分离出来。该细胞系可用于癌症研究。LS 174T是LS 180结肠腺癌细胞株的胰蛋白酶化变种。 它比亲本更易传代，象LS 180一样生成大量的癌胚抗原(CEA)。 电镜研究表明有丰富的微丝和细胞质粘液素液泡。 直肠抗原3阳性。 p53抗原表达阴性，但mRNA表达阳性。 LS 174T细胞角蛋白染色阳性。 癌基因c-myc, N-myc, H-ras, N-ras, Myb, 和 fos的表达呈阳性。 癌基因k-ras和sis的表达未做检测。据报道它能产生大量的癌胚抗原(CEA)。

细胞在本库通过支原体检测阴性（可供检测报告）。
细菌检测结果：阴性；真菌检测结果：阴性
细胞在本库通过STR检测无误（可供检测报告）。
STR鉴定结果：
Amelogenin: X
D5S818:11,16
D13S317: 10
D7S820: 10.3,11
D16S539: 11,13
vWA: 15,17
TH01: 6,7
TPOX: 8,9
CSF1PO: 10,13
D19S433: 14,15
D21S11: 29,31
D18S51: 11,13,14将含有1mL人结直肠腺癌细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察人结直肠腺癌细胞生长情况和细胞密度。人 白人女性直肠；结直肠腺癌

如果人结直肠腺癌细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁人结直肠腺癌细胞传代可以参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗人结直肠腺癌细胞1-2次。

2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若人结直肠腺癌细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持人结直肠腺癌细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

贴壁生长 (Adherent）58岁（58 years）上皮细胞， 贴壁生长大肠腺癌（Colorectal adenocarcinoma）

人结直肠腺癌细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；

1.人结直肠腺癌细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般人结直肠腺癌细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬人结直肠腺癌细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3.将要冻存的人结直肠腺癌细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。