SIRNA转染试剂
| 中文名称 | SIRNA转染试剂 |
|---|---|
| 中文同义词 | SIRNA转染试剂;MRNA转染试剤;TransIT-TKO? Transfection Reagent MIR 2155;TransIT-TKO? Transfection Reagent MIR 2154;TransIT-TKO? Transfection Reagent MIR 2150;TransIT-TKO? Transfection Reagent MIR 2156 |
| 英文名称 | SIRNA Transfection Reagent |
| 英文同义词 | Omifection-R;TranslT?-Jurkat Transfection Reagent;TransIT-TKOTransfection Reagent;EvaBio? siRNA Transfection Reagent |
| CAS号 | |
| 分子式 | |
| 分子量 | 0 |
| EINECS号 | |
| 相关类别 | 生物试剂-细胞生物学试剂 |
| Mol文件 | Mol File |
| 结构式 |
SIRNA转染试剂 性质
siRNA转染试剂一种优化的多组分低毒试剂，能够向多种常用细胞系有效递送小干扰RNA(siRNA)作用于序列特异的目标基因，引发基因表达下调或基因沉默。
RNA干扰（RNA interference，RNAi）是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。它是指小分子双链RNA可以特异性地降解同源mRNA，从而抑制或关闭特定基因表达的现象。只要知道了某种疾病的致病基因，就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA），抑制或封闭该致病mRNA的表达。siRNA是目前最为热门的生命科学研究领域之一，也是未来最有发展前途的新药开发领域。siRNA转染实验逐渐成为生命科学研究中常见手段。
做好siRNA转染的要点
1.纯化siRNA
siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。
2.避免RNA酶污染
微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过的物品或暴露在空气中的物品等，因此保证实验中的每个环节不受RNA酶污染非常重要。
3.健康的细胞培养物和严格的操作确保转染的重复性
通常，健康的细胞转染效率较高。此外，较低的传代数能确保每次实验所用细胞的稳定性。为了优化实验，推荐用50代以下的转染细胞，否则细胞转染效率会随时间明显下降。
4.选择合适的转染试剂
针对siRNA制备方法以及靶细胞类型的不同，选择好的转染试剂和优化的操作对siRNA实验的成功至关重要。如engreen的Entranster-R4000，专门针对siRNA等RNA转染。
Lipofectamine 3000是一款市场占有率和知名度都很高的转染试剂。该款产品采用了脂肪纳米微粒技术，它属于一种脂质体类的转染试剂。大家都知道Lipofectamine 2000原先是十分受欢迎的，但由于细胞毒性较为明显，其推广应用受到较大影响。Lipofectamine 3000较Lipofectamine 2000在成分上做了优化，细胞毒性和Lipofectamine 2000相比，要小了很多。尽管如此，Lipofectamine 3000对部分细胞还是存在较为明显的细胞毒性的。虽然其说明书表述该试剂对细胞作用温和、转染后非必需换液，但大多数科研者在分享转染经验时还是建议转染后6-8小时更换培养液，如果不及时更换新鲜的培养基，细胞死亡率还是比较高的，可达20-30%左右。不过，对于一些耐受性强的细胞，Lipofectamine 3000还是有比较不错的转染效率的。因而，研究者在选择使用Lipofectamine 3000时，需要考虑所要转染的细胞对脂质体的毒性是否耐受。
Lipofectamine RNAiMAX，是目前国际公认的最为权威的siRNA转染试剂之一。在赛默飞现售的所有转染试剂中，RNAiMAX的转染密度要求是最低的，细胞融合度在30-50%时就可以进行转染，而像Lipofectamine 2000/3000都要求融合度在70-90%之间转染。其实，要想知道一个转染试剂的毒性通过它的转染密度要求就能看出来，这也从侧面反应出，RNAiMAX的细胞毒性是更低的。
并且，相较Lipofectamine 3000，RNAiMAX做到了低siRNA浓度下就可获得优良的转染效果，转染性能又上了一个台阶。但是，实验者使用RNAiMAX转染试剂进行siRNA转染，转染后一般无需换液，但配制转染复合物时依旧需要额外购买Opti-MEM培养基。
Lipofectamine RNAiMAX作为这样一款高性能的siRNA转染试剂，RNAiMAX的售价自然不菲，其一支1.5mL规格的转染试剂，定价已逾万，这点对于很多经费有限的实验者来说往往需要考虑再三。
Starvio siRNA转染试剂上市以来受到了很多实验室的肯定。该试剂以新型可降解纳米材料为主要成分研发而成，区别于市场上的脂质体类转染试剂如Lipofectamine 3000、RNAiMAX。
Starvio siRNA转染试剂在各方面都有不错的表现。细胞毒性上，使用Starvio siRNA转染试剂在细胞融合度30-50%之间进行转染，转染后细胞死亡率只有5%左右，似乎还略优于RNAiMAX。转染效率上，Starvio siRNA转染试剂盒里配置有专研的siRNA转染增强剂，能够有效降低细胞膜的免疫排异反应，从而提升siRNA转染的效率。实验数据显示，Starvio在很多贴壁细胞中的mRNA敲除效率可高达95%左右。我们将Starvio和RNAiMAX分别转染小核酸NC-FAM到Hela细胞中，比较两个试剂的转染效率，结果发现，两者的转染效率皆达到了90%以上，难分伯仲。
RNA干扰（RNA interference，RNAi）是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。它是指小分子双链RNA可以特异性地降解同源mRNA，从而抑制或关闭特定基因表达的现象。只要知道了某种疾病的致病基因，就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA），抑制或封闭该致病mRNA的表达。siRNA是目前最为热门的生命科学研究领域之一，也是未来最有发展前途的新药开发领域。siRNA转染实验逐渐成为生命科学研究中常见手段。
做好siRNA转染的要点
1.纯化siRNA
siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。
2.避免RNA酶污染
微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过的物品或暴露在空气中的物品等，因此保证实验中的每个环节不受RNA酶污染非常重要。
3.健康的细胞培养物和严格的操作确保转染的重复性
通常，健康的细胞转染效率较高。此外，较低的传代数能确保每次实验所用细胞的稳定性。为了优化实验，推荐用50代以下的转染细胞，否则细胞转染效率会随时间明显下降。
4.选择合适的转染试剂
针对siRNA制备方法以及靶细胞类型的不同，选择好的转染试剂和优化的操作对siRNA实验的成功至关重要。如engreen的Entranster-R4000，专门针对siRNA等RNA转染。
siRNA（小干扰RNA，Small interfering RNA）转染实验是现代分子生物学研究中的一项重要技术，它基于RNA干扰（RNA interference, RNAi）原理，通过导入特定的siRNA分子来靶向并沉默特定的基因表达。需针对siRNA制备方法以及靶细胞类型的不同，选择合适的SIRNA转染试剂。
siRNA转染试剂应分别用无血清无双抗的培养基（如Opti-MEM）进行稀释，并混合形成转染复合物。在配制过程中，应避免粗暴操作，以免导致脂质体失效。siRNA它通过与细胞内特定mRNA序列的互补配对，触发RNA干扰机制，从而抑制对应基因的翻译。这一过程主要涉及以下几个步骤：
01、siRNA通过不同的转染方法（如磷酸钙共沉淀法、电穿孔法、阳离子脂质体转染等）进入细胞；
02、细胞内的Dicer酶将双链RNA切割成小片段，并与RNA诱导沉默复合体（RISC）结合；
03、反义链与靶mRNA配对，导致mRNA降解，从而阻止其翻译成蛋白质。
目前实验室最常用的siRNA转染试剂Lipofectamine 3000是一款市场占有率和知名度都很高的转染试剂。该款产品采用了脂肪纳米微粒技术，它属于一种脂质体类的转染试剂。大家都知道Lipofectamine 2000原先是十分受欢迎的，但由于细胞毒性较为明显，其推广应用受到较大影响。Lipofectamine 3000较Lipofectamine 2000在成分上做了优化，细胞毒性和Lipofectamine 2000相比，要小了很多。尽管如此，Lipofectamine 3000对部分细胞还是存在较为明显的细胞毒性的。虽然其说明书表述该试剂对细胞作用温和、转染后非必需换液，但大多数科研者在分享转染经验时还是建议转染后6-8小时更换培养液，如果不及时更换新鲜的培养基，细胞死亡率还是比较高的，可达20-30%左右。不过，对于一些耐受性强的细胞，Lipofectamine 3000还是有比较不错的转染效率的。因而，研究者在选择使用Lipofectamine 3000时，需要考虑所要转染的细胞对脂质体的毒性是否耐受。
Lipofectamine RNAiMAX，是目前国际公认的最为权威的siRNA转染试剂之一。在赛默飞现售的所有转染试剂中，RNAiMAX的转染密度要求是最低的，细胞融合度在30-50%时就可以进行转染，而像Lipofectamine 2000/3000都要求融合度在70-90%之间转染。其实，要想知道一个转染试剂的毒性通过它的转染密度要求就能看出来，这也从侧面反应出，RNAiMAX的细胞毒性是更低的。
并且，相较Lipofectamine 3000，RNAiMAX做到了低siRNA浓度下就可获得优良的转染效果，转染性能又上了一个台阶。但是，实验者使用RNAiMAX转染试剂进行siRNA转染，转染后一般无需换液，但配制转染复合物时依旧需要额外购买Opti-MEM培养基。
Lipofectamine RNAiMAX作为这样一款高性能的siRNA转染试剂，RNAiMAX的售价自然不菲，其一支1.5mL规格的转染试剂，定价已逾万，这点对于很多经费有限的实验者来说往往需要考虑再三。
Starvio siRNA转染试剂上市以来受到了很多实验室的肯定。该试剂以新型可降解纳米材料为主要成分研发而成，区别于市场上的脂质体类转染试剂如Lipofectamine 3000、RNAiMAX。
Starvio siRNA转染试剂在各方面都有不错的表现。细胞毒性上，使用Starvio siRNA转染试剂在细胞融合度30-50%之间进行转染，转染后细胞死亡率只有5%左右，似乎还略优于RNAiMAX。转染效率上，Starvio siRNA转染试剂盒里配置有专研的siRNA转染增强剂，能够有效降低细胞膜的免疫排异反应，从而提升siRNA转染的效率。实验数据显示，Starvio在很多贴壁细胞中的mRNA敲除效率可高达95%左右。我们将Starvio和RNAiMAX分别转染小核酸NC-FAM到Hela细胞中，比较两个试剂的转染效率，结果发现，两者的转染效率皆达到了90%以上，难分伯仲。