ARPE-19 人视网膜色素上皮细胞

ARPE-19细胞是一种自发产生的视网膜色素上皮（RPE）细胞系，来源于一名19岁男性的正常眼睛，该男性死于机动车事故中的头部创伤。ARPE-19细胞在DMEM培养基和Ham's F12培养基的1:1混合物中建立，培养基含有HEPES缓冲液、20%胎牛血清、56mM终浓度碳酸氢钠和2mM L-谷氨酰胺，并在37℃和10%CO2中孵育。在传代组织块底层细胞前对细胞进行了前四代选择性胰蛋白酶处理以去除表面细胞，到第5代时，培养物即是快速生长的RPE细胞，其形成鹅卵石单层，在培养数月后着色，细胞形成稳定的单层，表现出形态和功能极性。ARPE-19细胞在低血清浓度的培养基中，将细胞涂布在层粘连蛋白涂层的Transwell COL膜上时，细胞表现出形态学极化。ARPE-19细胞在培养4周后，它们形成紧密的连接，单层的跨上皮电阻达到最大50至100欧姆/cm2。ARPE-19细胞表达RPE特异性标记物CRALBP和RPE-65，细胞为二倍体，可传30代以上，在ATCC鉴定期间进行的长寿试验中，发现子代又可以进行另外48次传代。ARPE-19细胞可以用于3D细胞培养，也是一种合适的转染宿主。1） 来源：视网膜
2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长上皮细胞样(梭形或圆形)1.尽量吸干净T25瓶原培养基；2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4.将培养瓶放入37度培养箱消化；5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）视网膜色素上皮；自发永生；19岁贴壁细胞