兔子胰岛素(INS)ELISA KIT

竞争法本试剂盒应采用双抗体夹心法测定血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中的含量。兔1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。可检测样本中兔的INS，且与其类似物无明显交叉反应。胰岛素是由胰岛β細胞受內源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的激素而分泌的一種蛋白质激素。胰岛素它通过促进血液中的葡萄糖被肝脏、脂肪和骨骼肌细胞吸收来调节碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢。在这些组织中，吸收的葡萄糖要么通过糖化作用转化为糖原，要么通过脂肪生成作用转化为脂肪（甘油三酯），或者在肝脏的情况下，两者都转化为糖原。血液中高浓度的胰岛素会强烈抑制肝脏的葡萄糖生产和分泌。循环中的胰岛素还影响各种组织中蛋白质的合成。因此，它是一种同化激素，促进血液中的小分子转化为细胞内的大分子。血液中的低胰岛素水平具有相反的效果，它促进广泛的分解代谢，特别是储备的身体脂肪。β细胞对血糖水平很敏感，因此，当葡萄糖水平高时，它们会向血液中分泌胰岛素；而当葡萄糖水平低时，则会抑制胰岛素的分泌。胰岛素能促进细胞内葡萄糖的吸收和代谢，从而降低血糖水平。它们相邻的α细胞通过接受β细胞的提示，以相反的方式向血液中分泌胰高血糖素：血糖低时分泌增加，葡萄糖浓度高时分泌减少。胰高血糖素通过刺激肝脏中的糖原分解和葡萄糖生成来提高血糖水平。胰岛素和胰高血糖素根据血糖浓度的变化而分泌入血，是葡萄糖平衡的主要机制。胰岛素活性降低或缺失会导致糖尿病，这是一种高血糖水平（高血糖）的状况。因此，葡萄糖会在血液中积累。