在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么鸡ELISA试剂盒反应总是需要一定时间的温育。鸡ELISA试剂盒属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。
保温的方式除有的鸡ELISA试剂盒仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将鸡ELISA试剂盒板置于水浴箱中，鸡ELISA试剂盒板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，鸡ELISA试剂盒板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的妙布，后将鸡ELISA试剂盒板放在湿妙布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，待别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不直叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标常 [数学公式] 采规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。
洗涤在鸡ELISA试剂盒过程中虽不是一个反应步骧，但却也决定着实验的成败。鸡ELISA试剂盒就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相就体的干扰物质。聚苯乙焍等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在鸡ELISA试剂盒操作中，洗涤是*主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。