双萤光素酶报告基因检测试剂盒

双萤光素酶报告基因检测试剂盒 

一、产品简介。

本产品由萤火虫萤光素酶检测试剂和海肾萤光素酶检测试剂组成，在同一体系中依次测定两种萤光素酶的活性，从而实现双萤光素酶报告基因的检测。检测目的基因转录水平变化时可以将目的基因的转录调控元件或 5’端的启动子区域的 DNA 序列克隆到萤火虫萤光素酶基因的上游（5’端），也可以把目的基因的 3’-UTR 区域的 DNA 序列添加

到萤火虫萤光素酶基因的下游，构建报告基因质粒，与表达海肾萤光素酶的质粒共同转染细胞，表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶。萤火虫萤光素酶的表达水平通常反应目的基因在特定条件下的转录调控变化，而海肾萤光素酶的表达水平一般用作体系内参，来消除细胞转染效率和细胞数量等因素的影响。

二、运输与存储条件。

本产品低温运输，依据各组份保存条件分开保存，有效期 12 月。

三、特点与优势。

1. 本试剂灵敏度高于市售同类试剂，可以更有效的检测报告基因转录水平变化。

2. 本试剂盒操作简单，能够快速完成双萤光素酶报告基因检测。

四、使用说明。

1. 以 6 孔细胞培养板培养的贴壁细胞为处理对象，实验步骤如下：

2. 细胞转染。细胞转染实验请参考本公司转染试剂（Omifection，Cat：Omc-01）说明书中的实验步骤，将编码萤火虫萤光素酶基因的质粒与编码海肾萤光素酶基因的质粒按照 10:1（或 5:1）的比例混合，转入 6 孔板的细胞中，2 μg/孔。

3. 细胞裂解液配制。将 5×细胞裂解液与 ddH2O 按照 1:4 的比例混合，配制成 1×细胞裂解液。现

用现配，剩余的细胞裂解液可在 4℃保存一周。

4. 细胞裂解。转染 48 h，弃培养液，预冷的 PBS 洗涤细胞 1 次，加入 1 ml 细胞裂解液（1×），置于 4 ℃的摇床上，轻轻旋转 15-30 min，裂解细胞。裂解液转入 1.5 ml EP 管中，12,000×g，4 ℃离心 5 min，弃沉淀，上清转移至新的 EP 管中，作为待测样品。

5. 海肾萤光素酶检测试剂配制。每个样品需要 100 μl 海肾萤光素酶检测试剂。根据样品数量，按照海肾萤光素酶底物:SFAR 稀释液=1:50 的比例配制海肾萤光素酶检测试剂。

6. 活性测定。打开检测仪器，设置测定参数，一般延迟时间（整合时间）为 2 sec，测定时间为 10-20 sec。吸取 100 μl 萤火虫萤光素酶检测试剂，加入 EP 管（或 96 孔板）中，再加入 5-20 μl 待测样品（细胞裂解液），混匀，测定萤火虫萤光素酶活性值。同一检测体系中再加入 100μl 海肾萤光素酶检测试剂，混匀，测定海肾萤光素酶活性值。

7. 整理并分析萤火虫萤光素酶活性值与海肾萤光素酶活性值的比例，鉴定目的基因表达变化。

五、注意事项

1. 酶促反应受温度影响，待测样品和试剂应达到室温后再进行检测。

2. 萤火虫萤光素酶检测试剂不可反复冻融，可分装成100 μl/管，置于-80℃长期保存。

3. 手动测定时，样品加入底物时的间隔时间和混合次数尽量一致，减少操作误差。

4. 海肾萤光素酶的底物腔肠素是乙醇溶液，易挥发。收到产品时若发现其体积小于0.2 ml，可自行添加适当的无水乙醇补齐体积为0.2 ml。

注意：

1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。