2种细胞集落形成实验

  细胞集落形成实验是检测培养细胞增殖能力的有效方法之一，通过计算集落形成率(colony forming efficiency)，来测定测试细胞的增殖能力。

6孔板、吸管、枪头、血球计数板、基质胶等放入超净工作台消毒30min。

①取出贴壁率>90%的细胞（处于对数生长期），消化离心，重悬细胞并进行细胞计数。

②6孔板种板：实验分组，每个孔中加入1000个细胞，放入CO2培养箱培养。

③培养1周后，当肉眼可见集落形成时，取出6孔板，弃除培养液，每孔加入2mL甲醇固定30min，弃除甲醇，每孔加入2mL0.1%结晶紫染色3min，然后清洗掉结晶紫，数码相机拍照，光镜下计数集落

1．收集对数生长期的细胞进行活细胞计数，然后调整细胞浓度，用含20%FBS的DMEM制成1000活细胞／ml的细胞悬液。 

2．用蒸馏水制备1.2%、0.7%两个浓度的低熔点琼脂糖，高压灭菌后，维持在40℃不会凝固； 

3．1.2%琼脂糖和2xDMEM等体积混合，6孔板中加入1.4ml，RT凝固作为底层琼脂，置CO2温箱中备用； 

4．0.7%琼脂糖和2xDMEM等体积混合，再加入细胞悬液充分混匀，RT凝固作为上层琼脂，勿有气泡，将实验组和对照组分两组加好，盖上盖并作好标记。在室温放置20分钟使细胞琼脂悬液凝固。  

5．然后移培养板或平皿于CO2培养箱中37℃进行培养。 

6．培养7～l0天，肉眼观察并计数细胞集落。 

以肉眼可见的细胞团作为计数集落的标准。集落的计数和计算：集落数=n孔中细胞集落数总和/n孔，集落形成率=集落数/接种培养细胞总数×100％