脲酶（Urease，UE）测定试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
注 意： 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。UE活性与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关，反应了氮素状况。
脲酶（Urease，UE）测定试剂盒测定原理：
利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml比色皿、研钵、冰、和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，临用前加入5mL蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂4℃保存；
试剂二：液体12mL×1瓶，4℃保存；
试剂三A液：液体×1支，4℃保存；试剂三B液：液体×1瓶，4℃保存；临用前将A液倒入B液中混合，待用；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存；
脲酶（Urease，UE）测定试剂盒样本的前处理：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至578nm，蒸馏水调零。
2、酶促反应
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
样本（μL） | 20 | 20 |
试剂一（μL） | 90 |
|
蒸馏水（μL） |
| 90 |
试剂二（μL） | 190 | 190 |
混匀，放入37℃水浴1h后，10000g 25℃离心10min，取上清液。
2、将上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水）。
3、测氨量（在1ml比色皿中加入下列试剂）
| 测定管 | 对照管 |
稀释后的上清液（μL） | 400 | 400 |
试剂三（μL） | 75 | 75 |
试剂四（μL） | 75 | 75 |
充分混匀，室温放置20min
混匀，于578nm处，蒸馏水调零，读吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
脲酶（Urease，UE）测定试剂盒UE活力计算：
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。
1、血清（浆）UE活力的计算:
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷V样÷T=27.32×(ΔA -0.0373)
单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
2、组织、细菌或细胞中1μg NH3-N活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(V样×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/ g 鲜重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.0546×ΔA
10：稀释倍数；T：反应时间，60min； V反总：反应体系总体积：0.3mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500万。
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