游离胆固醇（free cholesterol, FC）含量测定试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
游离胆固醇（free cholesterol, FC）含量测定试剂盒测定意义：
FC是构成细胞膜的主要成分，也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。
测定原理：
FC氧化酶催化FC生成△4-胆甾烯酮和H2O2，过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500nm有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：异丙醇50mL（自备）；
试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体100μL×1瓶，4℃保存；
标准品：液体1mL×1支，浓度为0.5 μ mol/mL，4℃保存。
FC的提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），即FC待测液。
3．血清（浆）样品：直接测定。
游离胆固醇（free cholesterol, FC）含量测定试剂盒测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到500 nm，蒸馏水调零。
2.FC工作液的配制：临用前，吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中，充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中，充分混匀，FC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 标准管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC标准液和900μL FC工作液，混匀，37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
4. 测定管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC待测液和900μL FC工作液，混匀，37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
5、空白管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL 试剂一和900μL FC工作液，混匀，37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
注意：
1、 标准管和空白管只需测定一次。
2、若测定管产生白色浑浊，可以将待测液用异丙醇稀释2~5倍后测定，并在最后结果乘以相应倍数。
计算公式：
1. 血清（浆）中FC含量计算：
FC含量（μmol /dL）= C标准液×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）×100mL
=50×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）
C标准液：0.5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。
2. 组织中FC含量计算：
(1)按样本蛋白浓度计算
FC含量（μmol / mg prot）= C标准液×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷Cpr
= 0.5×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
FC含量（μmol / g鲜重）= C标准液×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷W
= 0.5×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷W
C标准液：0.5μmol/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g/mL
3. 细胞、细菌中FC含量计算：
FC含量（μmol /104 cell）= C标准液×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷细菌或细胞（104 cell /L）
=0.5×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷细菌或细胞（104 cell /L）
C标准液：0.5μmol/mL。
最低检出限为1nmol/mL。
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