基本描述
产品名称：苹果酸脱氢酶 (MDH)
规格或纯度：生物活性,ActiBioPure™,高性能,EnzymoPure™,重组,≥40 U/mg enzyme powder; expressed in E.coli
应用：Microbial metabolism in diverse environments, 次级代谢产物的生物合成, Carbon fixation in photosynthetic organisms, Carbon fixation pathways in prokaryotes, Citrate cycle (TCA cycle), Cysteine and methionine metabolism, Glyoxylate and dicarboxylate metabolism, Methane metabolism, Pyruvate metabolism
产品介绍：
苹果酸脱氢酶（Malate Dehydrogenase，MDH）是一种关键的氧化还原酶，在细胞代谢中催化苹果酸与草酰乙酸的可逆转化，参与三羧酸循环（TCA 循环）和能量代谢。
应用：该酶可用于临床分析中 L-苹果酸和谷草转氨酶（GOT）的酶法测定。
原理：
试剂：
A. K-磷酸盐缓冲液：0.1M, pH7.5;
B. 草酰乙酸盐溶液：15mM [2.0mg 草酰乙酸 (MW=132.1)/ml of 冰镇 K-磷酸缓冲液 (A)，此试剂稳定性较差，需置于冰浴中保存 ] (应现制现用)；
C. NADH 溶液：6.0mM [4.25mg NADH·2Na,(MW=709.4 )/ml of H₂O] (应现制现用)；
D. 酶稀释剂：0.1M K-磷酸盐缓冲液, pH7.5 含 0.2% BSA。
操作步骤：
1. 将反应混合物置于比色皿 ( (d=1.0 cm) ) 中，于 30℃恒温平衡约 5 分钟。
| 2.8 ml | K- 磷酸盐缓冲液，pH7.5 | ( A ) |
|---|
| 0.1 ml | 草酰乙酸盐溶液 | ( B ) | | 0.1 ml | NADH 溶液 | ( C ) |
|
测定混合液中的浓度
| K- 磷酸盐缓冲液 | 97mM |
|---|
| 草酰乙酸 | 0.49mM | | 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 | 0.20mM |
|
2. 加入 0.05ml 酶溶液 *, 轻轻倒置混合｡
3. 在 30℃恒温的分光光度计中，将样品与水对照，记录 340nm 波长下光密度 3-4 分钟的下降值，并根据曲线初始线性段计算每分钟光密度变化值 (△OD test)｡
同时，采用与测试相同的方法测定空白率 (△OD Blank), 但需将酶溶液替换为酶稀释液｡
* 将酶制剂溶解于冰浴冷却的酶稀释液 (D) 中，用相同缓冲液稀释至 0.05~0.5U/ml , 冰浴保存｡
计算方法：
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Vt：总体积 (3.05ml)
Vs：样品体积 (0.05ml)
6.22：测定条件下 NADH 的毫摩尔消光系数 (cm²/μM)
1.0：光路长度 (cm)
df：稀释因子
C：溶解液中的酶浓度 (c mg/ml)
生物活性：≥40 U/mg enzyme powder
N-末端序列：在 30℃､pH7.5 条件下，每单位可使 1 微摩尔 NADH 每分钟发生氧化反应｡
Accession #：P61889
级别：生物活性, 重组, ActiBioPure™, 高性能, EnzymoPure™
产品规格参数
浓度：≥40 U/mg enzyme powder; expressed in E.coli
复溶：Reconstitute in pure water.
储存条件：-20°C储存,避免反复冻融
运输条件：超低温运输
稳定性与储存：长期储存-20℃（12个月）；复溶后建议分装，避免反复冻融。
CAS编号和信息：9001-64-3
酶学委员会编号：EC 1.1.1.37
功能和特点
Accession #：P61889
生物活性：≥40 U/mg enzyme powder
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