基本描述
产品名称：核糖核酸酶T1
规格或纯度：重组,无DNA酶,分子生物学级,EnzymoPure™,≥95%(SDS-PAGE),expressed in E.coli;500 U/μl
产品介绍：
核糖核酸酶T1是一种来源于米曲霉 (Aspergillus oryzae) 的核糖核酸内切酶，可特异性地在单链 RNA 的鸟嘌呤核糖核苷酸 (G) 后进行切割，产生 3' 磷酸末端。 核糖核酸酶T1 能够形成核苷 2'，3-环磷酸中间体，以切割 3'-鸟苷残基与邻近核苷 5'-OH 基团之间的磷酸二酯键产生含末端 3'-GMP 的寡核苷酸和 3'-GMP。
核糖核酸酶T1 的活性不依赖于金属离子。
组分表
| R1522664 | 组件 | 物理外观 | 100KU | 5×100KU | 储存 | | R1522664A | 核糖核酸酶T1 (500 U/μl) | Liquid | 200ul | 5×200µl | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | | R1522664B | 10× 核糖核酸酶T1缓冲液 | Liquid | 1ml | 5×1ml | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. |
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活性定义
1 活性单位 (U) 是指在 37℃，pH7.5 条件下，以酵母 RNA 为底物， 使 A260 变化 1.0 所需要的酶量。
适用范围
1. 去除 DNA 中的 RNA；
2. 去除重组蛋白中的 RNA；
3. RNA 测序；
4. 用于核糖核酸酶保护试验（与 RNase A 结合使用）；
5. 测定不含 G 或低 G 含量 DNA 模板的转录水平。
质量控制
蛋白纯度
经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。
非特异性内切酶活性
37℃下，在 20 μl 反应体系中将 500 U 核糖核酸酶T1 与 200 ng 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
DNase 活性
37℃下，在 20 μl 反应体系中将 500 U 核糖核酸酶T1 与 15 ng 双链 DNA 片段共同温育 16 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA 片段无变化。
使用方法
1. 反应体系
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
|---|
| 单链 RNA（ssRNA） | 1~10 μg | 50~500 ng/μL | | 10× 核糖核酸酶T1缓冲液 | 2 μL | 1× | | RNase 抑制剂（40 U/μL）* | 1 μL | 2 U/μL | 核糖核酸酶T1 (500 U/μl)
| 0.4 μL | 10 U/μL | | 无核酸酶水 | 补至 20 μL | - |
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注 : 为避免 RNase A 等环境中的 RNase 污染使底物 RNA 降解，建议在反应体系中加入RNase 抑制剂（货号：R350859），底物 RNA 应在 RNase 抑制剂加入并混匀之后加入。
2. 推荐的反应条件 37℃孵育 15 min。可根据实际情况适当延长或缩短孵育时间以达到最佳酶切效果。
注意事项
- 多种金属离子可抑制核糖核酸酶T1的活性，包括 Mg²⁺ (100 mM MgCl₂ 约抑制 40% 的活性)、Ca²⁺ (10 mM CaCl₂ 约抑制 30% 的活性 )、Zn²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺ 等。除此之外，Guanylyl 2′-5′ guanosine 是核糖核酸酶T1的特异性抑制剂。
- 核糖核酸酶T1的热失活是可逆的，建议通过柱纯化或酚 / 氯仿抽提的方法去除核糖核酸酶T1。
- 在 pH 6.0 的溶液中， 核糖核酸酶T1可耐受 100℃加热 10 min；但在 pH > 9.0 的碱性溶液中不稳定。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。
Accession #：P00651
级别：重组, 无DNA酶, 分子生物学级, EnzymoPure™
产品规格参数
储存缓冲液：50 mM Tris-HCl, 50% Glycerol, pH 7.4@25℃.
浓度：expressed in E.coli;500 U/μl
储存条件：-20°C储存,避免反复冻融
运输条件：超低温运输
稳定性与储存：长期储存-20℃（24个月）；收货后建议分装，避免反复冻融。
CAS编号和信息：9026-12-4
酶学委员会编号：EC 4.6.1.24
单位定义：1 活性单位 (U) 是指在 37℃，pH7.5 条件下，以酵母 RNA 为底物， 使 A260 变化 1.0 所需要的酶量。
功能和特点
Accession #：P00651
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关键字： 核糖核酸酶T1;RNase T1;9026-12-4
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