方法与结果:采用MTT法、流式细胞术、实时荧光定量PCR和Western blotting法评价Thonningianin A对HepG-2人肝细胞癌细胞系的抗癌活性。结果表明,Thonningianin A通过诱导细胞凋亡有效抑制HepG-2细胞的增殖,表现为亚G1细胞群的增加、DNA片段化和活性氧含量的增加。caspase-9 的激活和随后的 caspase-3 的激活表明 Thonningianin A 诱导的细胞凋亡是半胱天冬酶依赖性的。Thonningianin A 还破坏了 HepG-2 细胞中的线粒体膜电位 (Δψm) 并下调了 Bcl-xL mRNA 的表达。Thonningianin A 通过改变细胞周期蛋白 D1 和 CDK4 mRNA 表达水平诱导细胞周期停滞。此外,Western blotting显示Thonningianin A显著下调NF-κ-B细胞存活途径,磷酸化P38表达水平上调,磷酸化ERK表达水平下调。结论:Thonningianin A的抗癌活性通过DNA片段化和细胞周期停滞的特征模式得到证实,表明ThA是天然植物性食品中有效的抗肿瘤成分,值得进一步研究。
采用NADPH和Fe2+/抗坏血酸诱导的脂质过氧化(LPO)、电子自旋共振波谱仪和脱氧核糖测定法研究了从非洲药草Thonningia sanguinea的甲醇提取物中分离出的鞣花单宁Thonningianin A(Th A)的抗氧化特性。方法和结果:10 μM 的 Thonningianin A 抑制大鼠肝微粒体中 NADPH 和 Fe2+/抗坏血酸诱导的 LPO 60%,对细胞色素 P450 活性没有抑制作用。Thonningianin A 类似于合成抗氧化剂单宁酸,作为 NADPH 和 Fe2+/抗坏血酸诱导的 LPO 的抑制剂,但比没食子酸、维生素 C 和维生素 E 更有效。虽然Thonningianin A对Fenton反应产生的羟基自由基的清除效果不佳,但它对1,1-二苯基-2-三硝基肼基、超氧阴离子和过氧自由基的剂量依赖性清除,IC50分别为7.5、10和30μM。此外,Thonningianin A 对黄嘌呤氧化酶的活性具有抑制作用,IC50 为 30 μM。在脱氧核糖测定中,血锥虫及其甲醇成分Thonningianin A仅显示位点特异性(Fe3+ + H2O2),但不显示非位点特异性(Fe3+ + EDTA + H2O2)羟基自由基清除,表明铁离子具有螯合能力。结论:光谱研究表明,在Fe2+离子存在下,Thonningianin A增强了可见光区域的吸光度。 这些结果表明,Thonningianin A的抗氧化特性包括自由基清除、抗超氧化物形成和金属螯合。
有证据表明,谷胱甘肽S-转移酶(EC:2.5.1.18,GST)的表达增加与肿瘤细胞对化疗药物的耐药性有关。在这项研究中,我们研究了从草药Thonningia sanguinea中分离出的新型抗氧化剂Thonningianin A(Th A)对未表征的大鼠肝脏GST和人GST P1-1的抑制作用。方法与结果:以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为底物,Thonningianin A以浓度依赖性方式抑制大鼠肝脏胞质GST活性,50%抑制浓度(IC50)为1.1 μM。当将Thonningianin A与已知的强效GST抑制剂进行比较时,抑制顺序是单宁酸>cibacron blue>hematin>Th A>ethacrynic酸,CDNB为底物。Thonningianin A 还表现出对 CDNB 和谷胱甘肽的非竞争性抑制。此外,使用1,2-二氯-4-硝基苯、乙丙烯酸和1,2-环氧-3-(对硝基苯氧基)丙烷作为底物,在1.0 μM下分别抑制胞质GST2%、12%和36%。人 GST P1-1 也被 Thonningianin A 抑制,IC50 为 3.6 μM。结论:虽然Thonningianin A对CDNB表现出竞争性抑制,但它对人GST P1-1的GSH表现出非竞争性抑制。这些结果表明,Thonningianin A代表了一种新的有效的体外GST抑制剂。
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刘盼盼