酵母质粒快速提取试剂盒（一步法）

酵母质粒提取：

1. 吸取20 μL One step yeast plasmid extract buffer到PCR管中；

2. 用无菌枪头或牙签蘸取适量酵母菌至PCR管中；

3. 吸打（搅拌）混匀后，置于98 ℃反应20 min；

4. 4000 rpm 离心 5min，用移液器小心地将上清液转移到另一个干净的PCR管中, 尽量不要吸出沉淀。

注意事项：

1. 挑取酵母克隆的量不宜过少，应如图2所示；

2. 离心收菌时，转速在4000rmp，不宜过高。

产物转化和鉴定：

1. 在冰上解冻转化所需的感受态细胞；

2. 取5 μL 收菌产物加入100 μL感受态细胞，轻弹管壁混匀，勿剧烈震荡混匀，冰上静置30min；

3. 42℃水浴1min后，立即至于冰上冷却2min;

4. 加入900 μL不含抗生素的SOC培养基。37℃，225 rpm摇菌1h；

5. 4000 rpm 离心 5min，弃800 μL上清液，用剩余液体重悬，涂布于对应抗性的平板；

6. 37℃过夜培养后，平板上可形成10个以上克隆，挑取单个克隆进行PCR鉴定。