肝细胞癌 （HCC） 是一种致命的癌症，迄今为止没有有效的化疗。目前，只有索拉非尼（一种多靶点酪氨酸激酶抑制剂）略微提高了 HCC 患者的生存率。方法和结果：在中医中经常用于治疗肝癌的蟾蜍毒液中寻找天然抗 HCC 成分时，我们发现 Arenobufagin 是一种来自蟾蜍毒液的蟾蜍内酯，对 HCC HepG2 细胞以及相应的多重耐药 HepG2/ADM 细胞具有有效的抗肿瘤活性。我们发现 Arenobufagin 诱导 HCC 细胞线粒体介导的细胞凋亡，线粒体电位降低，Bax/Bcl-2 表达比增加，Bax 从胞质溶胶易位到线粒体。Arenobufagin 还诱导 HepG2/ADM 细胞自噬。自噬特异性抑制剂（3-甲基腺嘌呤、氯喹和巴弗洛霉素 A1）或 Beclin1 和 Atg 5 小干扰 RNA （siRNA） 增强了 Arenobufagin 诱导的细胞凋亡，表明 Arenobufagin 介导的自噬可以保护 HepG2/ADM 细胞免于凋亡细胞死亡。此外，我们观察到 Arenobufagin 对磷脂酰肌醇 3-激酶 （PI3K） /Akt/哺乳动物雷帕霉素靶标 （mTOR） 通路的抑制作用。有趣的是，雷帕霉素或 siRNA 双链体对 mTOR 的抑制增强了 Arenobufagin 诱导的细胞凋亡和自噬。最后，Arenobufagin 抑制 HepG2/ADM 异种移植肿瘤的生长，这与聚 （ADP-核糖） 聚合酶切割、轻链 3-II 激活和 mTOR 抑制有关。结论：总之，我们首先在体外和体内证明了 Arenobufagin 对 HCC 细胞的抗肿瘤作用。我们阐明了 Arenobufagin 的潜在抗肿瘤机制，这些机制涉及通过抑制 PI3K/Akt/mTOR 通路实现细胞凋亡和自噬之间的串扰。本研究可能为未来使用 Arenobufagin 作为 HCC 化疗药物的临床应用提供理论依据。
建立了一种快速、灵敏、选择性的超快液相色谱-串联质谱定量测定大鼠血浆中 Arenobufagin 的方法。方法和结果：样品预处理包括使用 0.1 mL 大鼠血浆用甲醇进行一步蛋白沉淀。分离在 Shim-pack XR-ODS II（75 mm×2.0 mm，内径 2.1 μm）色谱柱上进行，梯度洗脱流速为 0.30 mLmin（-1）。流动相为乙腈和0.1%甲酸的水溶液。使用柱后切换阀以减少基质效应。电喷雾电离后，在三重四联串联质谱仪上以多反应监测模式进行检测。在 1.056-1056 ngmL（-1） 的浓度范围内获得 Arenobufagin 的线性校准曲线，定量下限为 1.056ngmL（-1）。在所有质量控制水平下，日内和日间精密度值均低于 15%，准确度范围为 5.4% 至 9.8%。结论：该方法成功应用于大鼠腹腔给药后血浆中 Arenobufagin 的测定和药代动力学研究。
血管生成对于致癌和其他血管生成过程至关重要。Arenobufagin 是蟾蜍毒液的主要成分之一，是一种用于癌症治疗的传统中药。它抑制几种癌细胞系的细胞生长。然而，人们对 Arenobufagin 的抗血管生成活性知之甚少。方法和结果：在这项研究中，我们发现 Arenobufagin 在体外抑制血管内皮生长因子 （VEGF） 诱导的人脐静脉内皮细胞 （HUVECs） 的活力、迁移、侵袭和管形成。Arenobufagin 还在离体模型中抑制了 VEGF 处理的主动脉环的发芽形成。此外，我们发现 Arenobufagin 在基质胶栓测定中阻断了血管生成。计算机模拟表明，Arenobufagin 通过对接与 VEGFR-2 的 ATP 结合位点相互作用。此外，Arenobufagin 抑制 VEGF 诱导的 VEGFR-2 自磷酸化，并抑制 VEGFR-2 介导的信号级联反应的活性。结论：综上所述，我们的研究结果表明 Arenobufagin 是 VEGF 介导的血管生成的特异性抑制剂
方法和结果：从蟾蜍毒液中分离的蟾蜍内酯 Arenobufagin 是一种有效的 Na + / K + 泵抑制剂，在全细胞膜片钳配置的单个豚鼠脑室细胞中进行了研究。细胞外施用 Arenobufagin （50 μM） 使延迟整流器 K+ 电流 （IdK） 的振幅降低 30%，而不影响门控动力学。L 型 Ca2+ 电流也受到抑制，但程度较轻。向内整流器 K+ 电流几乎没有受到影响。Ouabain 和含有 20 mM Na + 的溶液对细胞进行内部透析，以与 Arenobufagin 类似的方式抑制 IdK。另一方面，当 Na+/K+ 泵已经在不含 K（+） 的 Tyrode 溶液中被抑制时，Arenobufagin 也会抑制 IdK。结论：因此，对通道的直接影响和通过抑制 Na + / K + 泵的间接作用都可能参与 Arenobufagin 对 IdK 的抑制。
本研究旨在探讨 Arenobufagin 在体外和体内的抗血管生成作用。方法和结果：通过 MTT 法测定 Arenobufagin 对 CNE-2 、 Hep2 、 SH-SY5Y 、 LOVO 、 PC-3 和 DU145 细胞以及人脐静脉内皮细胞 （HUVECs） 的抗增殖作用。通过显微镜观察 Arenobufagin 处理后 LOVO 和 HUVECs 的细胞形态变化。Arenobufagin 以剂量依赖性方式抑制 CNE-2 、 Hep2 、 SH-SY5Y 、 LOVO 、 PC-3 、 DU145 和 HUVECs 的增殖。此外，明显观察到人癌细胞中 Arenobufagin 的亚细胞毒性浓度诱导 HUVECs 活力的显着降低。采用鸡胚绒毛膜尿囊膜 （CAM） 模型检测 Arenobufagin 体内抗血管生成作用。Arenobufagin 显着抑制 CAM 的血管生成。细胞周期分析显示，G2/M 期停滞，随着 Arenobufagin 浓度的增加，出现 sub-G1 峰。PI/Annexin V 双染色测定进一步证明 Arenobufagin 可以以剂量和时间依赖性方式诱导细胞凋亡。Arenobufagin 处理后，流式细胞术分析检测到的线粒体电位塌陷增加。它还观察到 PARP 被 Western blotting 裂解为 p85 活性形式。结论：综上所述，Arenobufagin 在体外和体内均具有显著的抗血管生成作用，其抗血管生成的作用机制可能与细胞周期停滞和静脉内皮细胞凋亡有关。
沙蟾毒精（Arenobufagin），CAS号为464-74-4，是一种化学物质，以下是对其的详细介绍：
分子式：C24H32O6
分子量：416.50g/mol（也有资料给出416.51g/mol，两者相差甚微，可能是由于计算精度或方法的不同）
英文名称：Arenobufagin
CAS号：464-74-4
纯度：通常可达到98%以上，检测方法为高效液相色谱法（HPLC）
沙蟾毒精主要来源于蟾蜍科动物的干燥分泌物，如中华大蟾蜍（Bufo bufo gargarizans Cantor）或黑眶蟾蜍（Bufo melanostictus Schneider）等。这些蟾蜍的分泌物中含有多种生物活性成分，沙蟾毒精便是其中之一。
沙蟾毒精为白色或类白色粉末，可溶于甲醇、乙醇、DMSO等有机溶剂。其具体的物理和化学性质可能因提取方法和纯度等因素而略有差异。
沙蟾毒精具有多种生物活性，包括抗癌、抑制细胞侵袭和抑制血管生成等。这些活性使得沙蟾毒精在癌症治疗、药物研发等领域具有潜在的应用价值。
抗癌活性：研究表明，沙蟾毒精能够诱导癌细胞凋亡和自噬，从而抑制癌细胞的生长和扩散。
抑制细胞侵袭：沙蟾毒精还能抑制某些癌细胞的侵袭能力，这有助于防止癌细胞的转移和扩散。
抑制血管生成：通过抑制血管内皮生长因子（VEGF）介导的血管生成，沙蟾毒精可以进一步抑制肿瘤的生长和转移。
沙蟾毒精应在低温下保存，避免长时间暴露在空气中，以免含量降低。
在使用沙蟾毒精进行实验研究时，应严格遵守实验室安全操作规程，确保人员和环境的安全。
沙蟾毒精可由多家化学试剂供应商提供，价格因供应商、纯度、包装规格等因素而异。具体价格需与供应商进行洽谈。
综上所述，沙蟾毒精是一种具有潜在应用价值的化学物质，其来源于蟾蜍科动物的干燥分泌物，具有抗癌、抑制细胞侵袭和抑制血管生成等多种生物活性。在使用时需注意保存条件和实验室安全操作规程。
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刘盼盼