3-甲氧基苯酚，149-32-6， 萃园自制中药标准品对照品;实验科研级;≥98%以上

洋葱伯克霍尔德氏菌 R34 2,4-二硝基甲苯双加氧酶在 DntAc 缬氨酸 350 下的饱和诱变，用于合成硝基氢醌、甲基氢醌和甲氧基氢醌。

方法和结果：
洋葱伯克霍尔德菌 R34 的 2,4-二硝基甲苯双加氧酶 （DDO） 在 DntAc α 亚基缬氨酸 350 位置发生突变体 V350F，对邻硝基苯酚 （47 倍） 、间硝基苯酚 （34 倍） 和邻甲氧基苯酚 （174 倍） 的活性显著增加，以及现在包括 m-甲氧基苯酚的扩大底物范围、邻甲酚和 m-甲酚 （野生型 DDO 对这些底物没有可检测的活性）。另一种突变体 V350M 对邻硝基苯酚（20 倍）和邻甲氧基苯酚（162 倍）的活性也增加，对邻甲酚也显示出新的活性。使用表达来自 pBS（Kan）R34 的重组 R34 dntA 基因座的大肠杆菌 TG1 全细胞合成产物，并通过反相高压液相色谱法在 1 mM 底物下测定产物形成的初始速率。V350F 以 0.75 +/- 0.15 nmol/min/mg 的速率产生硝基氢醌蛋白质，以 0.069 +/- 0.001 nmol/min/mg 的速率从邻硝基苯酚中产生 3-硝基邻苯酚，以 0.29 +/- 0.02 nmol/min/mg 蛋白质的速率从间硝基苯酚中产生 4-硝基邻苯二酚，以 2.5 +/- 0.6 nmol/min/mg 蛋白质的速率产生 3-硝基邻苯二酚，以 0.29 +/- 0.02 nmol/min/mg 蛋白质的速率产生 3-硝基邻苯二酚，来自 m-甲氧基苯酚的甲氧基氢醌在 0.55 +/- 0.02 nmol/min/mg 蛋白质中，甲基氢醌为 1.52 +/- 0.02 nmol/min/mg 蛋白质和 2-羟基苯甲醇为 0.74 +/- 0.05 nmol/min/mg 蛋白质（来自邻甲酚），甲基氢醌为 0.43 +/- 0.1 nmol/min/mg 蛋白质（来自间甲酚）。V350M 以 0.33 nmol/min/mg 的速率从邻硝基苯酚中产生硝基氢醌和 0.089 nmol/min/mg 蛋白质的 3-硝基邻苯二酚，以 2.4 nmol/min/mg 蛋白质的速率从邻甲氧基苯酚中产生甲氧基氢醌，以 1.97 nmol/min/mg 的蛋白质产生甲基对苯二酚，以 0.11 nmol/min/mg 的速率从邻甲酚中产生 2-羟基苯甲醇。DDO 变体 V350F 和 V350M 对萘（8 +/- 2.6 nmol/min/mg 蛋白质）的活性也表现出 10 倍增强的活性，形成 （1R，2S）-顺式-1,2-二氢-1,2-二羟基萘。
结论：
因此，通过活性位点工程对野生型 DDO 的诱变产生了对以前未表征的一类硝基芳烃双加氧酶取代酚的变体，其速率相对较高;针对野生型 DDO 评估了 7 种先前未表征的底物，并为 DDO 变体 V350F 和 V350M 发现了 4 种新型单加氧酶样产物（甲氧基对苯二酚、甲基对苯二酚、2-羟基苯甲醇和 3-硝基邻苯二酚）。