牛痘病毒加帽体系利用牛痘病毒加帽酶及相关组分,将 7-甲基鸟苷帽结构(m7Gppp,Cap0) 加到 RNA 的 5´末端。在真核生物中,该结构与 mRNA 的稳定、转运和翻译密切相关。使 用酶促反应为 RNA 加帽是一种简单有效的方法,且帽结构与天然 Cap 0 结构完全一致,能 显著改善用于体外转录、转染和显微注射的 RNA 的稳定性和翻译能力。该酶由两个亚基(D1 和 D12)组成,兼具 RNA 三磷酸酶、鸟苷转移酶和鸟嘌呤甲基转移酶的功能,它们对于添 加一个完整的 Cap 0 结构 m7Gppp5´N 都是必须的。 由牛痘病毒加帽酶构建的带帽 RNA 产品具有 Cap 0 结构。通过在加帽反应中同时使用 mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶和牛痘病毒加帽酶,Cap 0-RNA 可以转化为“ Cap 1”结构。 mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶通过将甲基从供体分子 SAM 转移到 Cap 0- RNA 5’端紧邻帽结 构的第一个核苷酸的 2'-O 位置,从而从 Cap 0-RNA 制备 Cap 1-RNA。
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