抗性淀粉检测试剂盒(分光光度法50T/48S）

抗性淀粉检测试剂盒-分光法50T

前言

抗性淀粉（RS）是指在人小肠内不能被酶解的淀粉，在大肠部分或完全发酵。RS 是总膳食纤维的组分之一。抗性淀粉的测定方法： 样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振荡水浴孵育16 小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成 D-葡萄糖，孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇）终止反应。离心上述溶液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的RS，用含水的 IMS 或乙醇（50%v/v）洗涤絮状团，洗涤后离心，再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清混合。小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入 2M KOH 溶解，溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，用 AMG 将淀粉定量水解成葡萄糖。D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂（GOPOD）测定，这也是对样品中 RS 含量的测定。非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定可通过集中的上清液并定容至 100mL，再用 GOPOD 测定 D-葡萄糖完成。

应用性和精确性

这个方法需要样品中 RS 含量多于 2% w/w，如 RS 含量多于 2% w/w，常规标准误差为±5%，少于2%w/wRS的误差更高。

需要的仪器设备

1. 离心式粉碎机，带有齿轮转子和 1.0mm 筛子，或类似的装置；小型样品可选择磨碎机替代。

   2. 绞肉机-手动或电动的，装有 4.5mm 筛

   3. 台式离心机

   4. 振荡水浴器，可设定为每分钟 100 次直线运动（振荡速度为每分钟 200 里程），振荡距离35mm,37℃

   5. 水浴锅

   6. 涡旋仪

   7. 磁力搅拌器

   8. 磁力搅拌棒-5×15mm

   9. pH 计

   10. 计时器

   11. 分析天平（精确到 0.1mg）

   12. 分光光度计-能够设定 510nm（10mm 路径长度）

   13. 100μL 移液器及一次性枪头

   14. 连续分配器配有 50mL 管嘴，能够移取 2.0mL，3.0mL 和 4.0mL

   15. 温度计-能够读取 37+0.1℃和 50+0.1℃

   16. 容量瓶-100mL，200mL，500mL，1L，2L