超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)试剂盒说明书(WST-8 法)
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生岐化作 用,生成 H2O2和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是 H2O2 主要生成酶,在生物抗氧化系统中 具有重要作用。
测定原理:
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.),O2-.可与 WST-8 反应产生水溶性染料甲臜, 后者在 450nm 处有吸收;SOD 可清除 O2-.,从而抑制了甲臜的形成;反应液黄色越深,说明 SOD 活性愈 低,反之活性越高。
自备仪器和用品:
分光光度计、离心机、移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10 4个): 提取液体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液),超声波破碎细菌或 细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰 上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提 取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
温馨提示:本产品不可用于临床,详询客服。
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