糖原含量试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖,是糖的主要的储存形式之一,主要贮存在肝和肌肉中作为备 用能量,分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度,当血糖升高时可在肝脏合成糖原,血糖降低 时,肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此,肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中 糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时,肌糖原不能直接分解成血糖,必须先分解产生乳酸,随血液循 环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。
测定原理:
蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原,在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。
糖原提取:
1﹑细胞或细菌:收集 500~1000 万细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;加入 0.75ml 提取液超声波破碎 细菌或细胞(功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);转移至 10ml 试管中,95℃水浴 20min (盖紧,防止水分散失),隔 5min 振摇试管 1 次,使充分混匀;取出试管冷却后,用蒸馏水定容到 5ml, 混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。
2﹑组织:称取 0.1~0.2g 样品,加入 0.75ml 提取液充分匀浆;转移至 10ml 试管中;95℃水浴 20min(盖紧, 防止水分散失),隔 5min 振摇试管 1 次,使充分混匀;待组织全部溶解后,取出试管冷却后,用蒸馏水 定容到 5ml,混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测
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