蛋白表达预实验服务

蛋白表达预实验服务内容

本服务提供从基因到蛋白表达的全流程预实验支持，涵盖原核（如大肠杆菌BL21(DE3)菌株）、真核（如毕赤酵母pPICZ/pPICZα载体）及哺乳动物细胞（如pCMV-N-YFP质粒）等多种表达系统。客户需提供目的基因序列（或GenBank登录号）、蛋白种属、分子量及特征（如分泌型、膜蛋白、毒性蛋白等），并选择基因合成（含密码子优化）或自有模板。服务参数包括诱导条件优化（温度25–30℃、IPTG浓度及诱导时间）、小规模表达测试（≤1L培养体积）及表达水平检测（如SDS-PAGE、Western Blot或荧光标记分析）。

使用流程与注意事项
实验流程包括载体构建、宿主转化、诱导表达及样本处理（裂解、离心等）。需注意：1）毒性蛋白建议使用专用菌株（如Agilent Competent Cell Pack）或哺乳动物系统以避免包涵体；2）分泌型蛋白需配套信号肽载体；3）样本需添加蛋白酶抑制剂并低温保存以防降解。预实验结果将提供表达效率、可溶性及纯度（≥70%）分析报告，并推荐放大实验条件。

特别提示
客户需明确蛋白后期应用（如结晶、抗原制备），以便优化表达策略。存储条件依系统而异（如-80℃保存competent cells），载体抗性需匹配筛选标记（如卡那霉素）。预实验周期通常为2–4周，建议提前沟通特殊需求（如同位素标记）。