BRD4 (E2A7X) 兔单克隆抗体

在表观遗传学与肿瘤研究领域，溴结构域蛋白4（BRD4）作为调控基因转录的关键因子，其功能解析依赖于高特异性抗体的技术支撑。作为抗体领域的标杆产品，BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb（货号：13440T）凭借其卓越的抗原识别能力与多平台兼容性，成为科研工作者解析BRD4生物学功能的首选工具。本文将从技术原理、性能验证、应用场景三维度展开深度评测。

一、技术原理：精准靶向BRD4长亚型的分子机制

1. 抗原表位设计

该抗体针对BRD4蛋白长亚型（UniProt #O60885-1）的C末端表位（Leu1129残基周边序列）开发，其免疫原为合成多肽片段，具有三大技术优势：

• 亚型特异性：仅识别BRD4长亚型（约200 kDa），不与短亚型（约140 kDa）或其他溴结构域蛋白（BRD2/3）交叉反应。

• 表位保守性：所选表位在人类、小鼠、大鼠等物种间高度保守（同源性>95%），支持跨物种研究。

• 构象依赖性：通过ELISA与表面等离子共振（SPR）验证，仅识别天然构象下的BRD4蛋白，避免变性蛋白的非特异性结合。

2. 抗体工程化改造

采用兔源单克隆抗体技术，通过以下优化提升性能：

• 高亲和力成熟：经噬菌体展示技术筛选，亲和力常数（Kd值）达10⁻¹⁰ M级别，确保低丰度蛋白的检测灵敏度。

• 低背景信号：通过亲和层析与负筛选工艺，去除结合Fc受体或非特异性蛋白的抗体亚群，背景信号强度低于0.05%输入。

• 无载体配方：提供BSA/叠氮化钠免费配方（货号#35632），适用于体内标记或质谱分析等特殊实验需求。

二、性能验证：多维度实验数据支撑

1. Western Blot性能

• 细胞系验证：在RL-7（睾丸生殖细胞瘤）、293T（肾上皮细胞）、Jurkat（T淋巴细胞）等细胞系中，可清晰检测内源性BRD4长亚型表达。

• 稀释比优化：推荐工作浓度为1:1000，线性检测范围覆盖0.5-50 μg总蛋白加载量。

2. 染色质免疫沉淀（ChIP）性能

• 富集效率：在HEK293细胞中，可特异性富集BRD4结合位点（如MYC基因启动子区），富集倍数达30倍以上。

• 试剂盒兼容性：与SimpleChIP® Plus Sonication Chromatin IP Kit（货号#56383S）联用，染色质结合回收率超过85%。

3. 免疫沉淀（IP）性能

• 复合物捕获：高效捕获BRD4蛋白复合物，结合质谱分析可鉴定出MED1、CDK9等核心互作蛋白。

• 洗涤条件优化：在50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl、0.1% Tween-20缓冲液中，非特异性结合率低于0.1%。