生物兼容性的单细胞测序用氟油Fluo-Oil 135

氟油Fluo-Oil 135（FO135）：平替3M HFE7500氟油，具有生物兼容性，适用于单细胞、ddPCR和细胞培养等

3M公司将: 到2025年底，停止所有PFAS的生产：3M将停止生产所有含氟聚合物、氟化流体和基于PFAS的添加剂产品。我们将帮助客户有序过渡。3M打算在过渡期间履行目前的合同义务。

PFAS包含HFE7500、HFE7200、HFE7100系列氟油产品。

Emulseo推出替换性产品 Fluo-Oil 135氟油，具有一致的稳定性、可靠性和最佳分子保留，确保您的项目实验连续进行，不会中断。

Fluo-Oil 7500和HFE7500氟油的参数比较如下所示：

与3M HFE7500油产生液滴性能的测试比较

分别用3M HFE7500和Fluo-Oil 135氟化油稀释FluoSurf neat表面活性剂，得到4w/w%的质量浓度。

水滴产生或油包水液滴产生的两相流速：

油相流速为300μL/hr，水相流速为100μL/hr。

水相为PBS溶液或100μM荧光素的PBS溶液（用于测试液滴的泄露）

倒置显微镜观察和Image J软件分析。

一、液滴尺寸及其分布

在Fluo-Oil 135和HFE7500油中，产生相似尺寸的水滴。在既定流速参数下，液滴的平均直径为110μm。液滴尺寸的CV分别为2.3%（Fluo-Oil 135油）和2.9%（HFE7500油）。

二、液滴稳定性

大多数研究团队使用液滴微流体进行细胞封装或 PCR 应用。因此，需要通过 PCR 的加热循环以及在 37°C 下长期孵育来产生稳定的液滴。表面活性剂的选择至关重要，但选择油同样重要，以确保可重复的实验以及单分散液滴群的生成和保存。

分别从三个方面测试液滴的稳定性：一是把液滴重新注入到玻璃观察腔室内；二是经典的PCR热循环过程，循环过程30次，每次热循环为98°C运行10s, 50°C运行5s, 72°C运行10s；三是置于37℃的培养箱内放置3天。对1万个液滴进行分析。

结论：

无论是在 Novec™ HFE 7500 还是 Fluo-Oil™ 135 中形成 FluoSurf™ 稳定的液滴，在 PCR 加热循环后或在 37°C 孵育 3 天后，液滴平均尺寸在生成时保持不变 [约 110µm (0.7nL)] 。此外，液滴种群仍然是单分散的。根据统计分析，计算出在加热循环后，只有 5% 的整体液滴的大小与平均初始液滴直径的差异超过 10%。

将氟油从 Novec™ HFE 7500 切换到 Fluo-Oil™ 135 对液滴稳定性没有影响。

三、液滴内的分子保留

基于液滴的化学或生化分析依赖于试剂在单个液滴中保持隔离。泄漏到连续相和液滴之间的交换，即使很低，也会影响结果的完整性，因此，分子保留是选择氟化油时要考虑的重要参数。众所周知，氟化油会限制液滴之间的分子交换，因此应验证切换油的影响。

同时生成两种油包水乳液[“空”（负载 PBS）和“满”（负载荧光素）液滴]，一次使用 Novec™ HFE7500，然后使用 Fluo-Oil™ 135 作为连续相。两种混合物，每一种都包含两个种群，在 37°C 下孵育，并在不同的时间点拍摄照片。使用 ImageJ 软件对液滴内荧光强度的演变进行了统计定量分析。

图 3 显示了两个群体之间平均荧光强度差异的演变（染料加载和空液滴）以及在初始时间点和 48 小时后相关的荧光和明场图片。

在 24 小时的过程中，两种氟化油产生的液滴中荧光素的泄漏率相似（约 15% 泄漏），并且在 Fluo-Oil™ 135 中产生液滴的情况下保持恒定 3 天。相反，在 24 小时后， Novec™ HFE7500 中液滴的泄漏继续减少并达到 30% 左右。这种较长孵育时间的较差保留性能可归因于后一种油的粘度略低，加速了液滴之间更快的分子交换。

结论

对于基于液滴的微流体应用，从一种氟化油类型切换到另一种类型可能会对微流体实验的过程产生重大影响，尤其是对液滴的有效生成产生重大影响。在 Novec™ HFE7500 和 Fluo-Oil™ 135 的情况下，已证实更换这两种氟化油对实验条件和结果没有影响。当使用 Fluo-Oil™ 135 作为连续相时，甚至可以观察到荧光素在液滴内的更好保留。

氟化油Fluo-Oil™ 135 是用于液滴微流体应用的 Novec™ HFE7500 的有效替代品。

与FluoSurf Neat含氟表面活性剂、表面处理疏水试剂Fluo-ST3搭配使用，效果更佳。