漆酶(Laccase)试剂盒说明书
微量法 100T/48S
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
漆酶(CE1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,属于铜蓝氧化酶家族,广泛分布于真菌和高等植物中, 具有较强的氧化还原能力,在纸浆生物漂白,环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常 广泛的应用。
测定原理:
漆酶分解底物 ABTS 产生 ABTS 自由基,在 420nm 处的吸光系数远大于底物 ABTS,测定 ABTS 自由 基的增加速率,可计算得漆酶活性。
自备仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
酶液提取:
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 30min,取上清,置冰上待测。
2、细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1ml 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 4℃,10000g 离心 10min,取上清置于冰上待测。
3、细胞培养液:直接检测。
伊势久(江苏连云港)生物科技有限责任公司
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