丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸,生成过氧化脂质;后者逐渐分解为一系列复杂的化合物,其中 包括 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。
测定原理:
MDA 与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)缩合,生成红色产物,在 532nm 有最大吸收峰,进行 比色后可估测样品中过氧化脂质的含量;同时测定 600nm 下的吸光度,利用 532nm 与 600nm 下的吸光度 的差值计算 MDA 的含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰 和蒸馏水
注意事项 临用前注意试剂一是否完全溶解,如未溶解,可以 70℃-90℃加热,并振荡以促进溶解。
MDA 提取:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10 4个): 提取液体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液),超声波破碎细菌或上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提 取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
血清(浆)样品:按照血清(浆):提取液体积(ml)为 1:1 的比例,充分混合。8000g 4℃离心 10min, 取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、吸取 0.2ml 试剂一于 1.5ml 离心管中,再加入 0.2ml 样本, 混匀。
2、95℃水浴中保温 30min(盖紧,防止水分散失),置于冰浴中冷却,10000g,25℃,离心 10min。
3、吸取 200μl 上清液于微量石英比色皿或 96 孔板中,测定 532nm 和 600nm 处的吸光度,记为 A532 和 A600,ΔA= A532-A600。
关键字: 丙二醛(MDA)检测试剂盒;
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