过氧化氢酶(Catalase,CAT)试剂盒(钼酸铵比色法)说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的 H2O2 清除酶,在活性氧 清除系统中具有重要作用。
测定原理:
过氧化氢能氧化 MoO4 2-成 MoO5 2-,MoO5 2-接受氢氧根的电子成键,分子间立即脱水缩合,得到稳定的 黄色复合物(H2MoO4·XH2O)n 在 405nm 处有强烈吸收峰,其吸光值和过氧化氢浓度成线性关系。测定出体 系剩余过氧化氢在 405nm 的吸光值即可反映 CAT 的催化活性。
自备仪器和用品:
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10 4个): 提取液体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液),超声波破碎细菌或 细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰 上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提 取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405 nm。
2、在 EP 管中加入下列试剂
温馨提示:本产品不可用于临床,详询客服。
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