C1498-LUC（小鼠急性骨髓性白血病带荧光素酶）
一、细胞基本属性 |
细胞名称 | C1498-LUC（小鼠急性骨髓性白血病带荧光素酶） |
细胞别称 | C1498-LUC |
商品货号 | BES2075MC-L |
种属来源 | 小鼠 |
年龄性别 | - |
组织来源 | 急性髓系白血病 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
背景简介 | - |
生物安全等级 | - |
细胞规格 | 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
支原体检测 | 无 |
培养基 | DMEM-H+10%FBS+1%P/S |
培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
冻存条件 | 无血清冻存液，液氮储存 |
倍增时间 | ~24-30小时 |
细胞筛选：
该细胞为已经稳定转染LUC的细胞，随细胞传代次数的增加，其LUC荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。
细胞经过20μg/ml嘌呤霉素筛选，平时培养可维持10μg/ml嘌呤霉素
二、细胞接收后的处理
1) 收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于室温放置约1h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2) 离心管直接在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞后，根据离心后的沉淀量进行传代，转移至T25培养瓶中后，请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3) 悬浮细胞：传代时使用【半换液法】对细胞状态有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代，刚收到细胞时建议1:2传代较为合适。
4) 备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
三、细胞培养操作
1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含8mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
【半换液法】
悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。
【离心换液法】
如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a) 收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b) 根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度1×10^6~1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c) 将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
四、培养注意事项
1) 细胞出现问题，予以重发情况
a) 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；
b) 细胞污染问题，请在收到产品3 天内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；
c) 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后2 天后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；
d) 干冰冻存发货的细胞复苏后2天后或常温发货的细胞静置2 小时候并且未开封，出现污染，重发；
e) 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，和每天的细胞照片，核实后予重发；
f) 细胞收到当天以及第2,3 天请拍照，3 天未告知的，视为产品合格。4-7 天内出现问题需提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题的照片以及细胞相关操作的详细步骤，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。
2) 细胞出现问题，不予以重发的情况
a) 客户操作造成细胞污染，不重发；
b) 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；
c) 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
d) 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3 天的细胞状态照片，不重发；
e) 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；
f) 收到细胞并发现问题与客服人员沟通的时间证明大于7 天的，不重发；
g) 视具体情况而定
五、注意事项
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
3. 该细胞仅供科研使用！说明书仅供参考以实际到货说明书为准！
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上海博尔森生物科技有限公司成立于2020年09月02日，注册地位于上海市松江区石湖荡镇石湖新路95号。
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