MTT溶液(5mg/ml)
简介：
MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，汉语化学名为3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐，是一种黄颜色的染料。MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在特定溶剂(如DMSO)存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570 nm波长附近的吸光度。通过OD值的大小，可以判断活细胞的数量或活性，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与活细胞的数量或活性成正比。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
组成：
产品名称 | CD003-10ml | Storage |
MTT solution(5mg/ml) | 10ml | -20 ℃避光 |
说明书 | 一份 |
保存条件：
-20 ℃避光保存,18个月有效期。
操作步骤（仅供参考）：
1、 细胞用含血清的培养液培养至对数生长期，常规胰蛋白酶消化液消化细胞（悬浮细胞无需消化）。
2、 低速离心，收集细胞沉淀。
3、 用培养液重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。
4、 细胞接种于96孔培养板，一般接种密度为3000～10000 /孔。通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞，细胞毒性实验每孔加入6000个细胞即可。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。
5、 37℃5% CO2继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养6～24h。
6、 按照实验具体要求，给予0～20ul干预药物处理，37℃ 5% CO2继续培养至合适时间。
7、 弃培养液，每孔加入10ul MTT solution和100ul新鲜培养液，在细胞培养箱内继续孵育4h。
8、 弃培养液，每孔加入110ul DMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多，溶解的时间会长一些。
9、 在酶联免疫检测仪570 nm测定各孔吸光度。
注意事项：
1、 MTT solution(5mg/ml)尽量减少反复冻融的次数，以免失效，当颜色变为灰绿色时，请勿使用。
2、 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，应注意蒸发问题。
3、 MTT solution在低温情况下会凝固，使用前请置于室温或20～25 ℃水浴至全部融解后使用。
4、 观察formazan是否完全溶解，亦可以借助光学显微镜观察。
5、 培养细胞时尽量细菌避免污染。
6、 应注意设立OD调零孔和对照。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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