伊文思蓝染色液（2%）

伊文思蓝染色液(2%)

产品简介：

伊文思蓝(EvansBlue)又称偶氮蓝，分子式C34H24N6Na4O14S4，分子量为960.80，CAS号为314-13-6伊文思蓝与台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。

组成：

储存条件：

4℃避光，12个月有效。

操作步骤（仅供参考）：

1. 血脑屏障通透性

1. 先将EvansBlueStain(2%)稀释成EvansBlueStain(0.5%)，取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射EvansBlueStain(0.5%)，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h后处死小鼠，取目的脑组织。

2. 脑组织置于1.5ml离心管中，加入1mlPBS，迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,离心。

3. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。该步骤亦可采用如下操作:取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。

4. 离心15min。

5. 取上述溶液，用分光光度计测620nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。

1. 活细胞染色

1. 取100μl重悬细胞到常规离心管内，入100μlEvansBlueStain轻轻混匀染色(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。

2. 吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。

细胞存活率计算公式如下:细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%

注意事项：

1. EvansBlueStain对人体有轻微毒性，请小心防护。

2. 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。

3. 血脑屏障通透性实验中，EvansBlueStain注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。

4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6. 本产品仅供科研使用，严禁它用。