试剂盒组成:
名称  | 96孔配置  | 48孔配置  | 备注  | 
微孔酶标板  | 12孔×8条  | 12孔×4条  | 无  | 
标准品  | 0.3mL*6管  | 0.3mL*6管  | 无  | 
样本稀释液  | 6mL  | 3mL  | 无  | 
检测抗体-HRP  | 10mL  | 5mL  | 无  | 
20×洗涤缓冲液  | 25mL  | 15mL  | 按说明书进行稀释  | 
底物A  | 6mL  | 3mL  | 无  | 
底物B  | 6mL  | 3mL  | 无  | 
终止液  | 6mL  | 3mL  | 无  | 
封板膜  | 2张  | 2张  | 无  | 
说明书  | 1份  | 1份  | 无  | 
自封袋  | 1个  | 1个  | 无  | 
备注:
1. (96T/48T)打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。
2. 标准品浓度依次为:320、160、80、40、20、0 pg/mL。
3. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
2. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象;放置室温,轻摇均匀,待结晶完全溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液,未用完的放回4℃
3. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。。
注意事项:
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
 
示例数据:
标准品浓度(pg/mL)  | 5000  | 2500  | 1250  | 625  | 312.5  | 156.25  | 78.13  | 0  | 
OD值  | 2.422  | 1.643  | 0.928  | 0.781  | 0.529  | 0.264  | 0.185  | 0.063  | 
校正OD值  | 2.359  | 1.58  | 0.865  | 0.718  | 0.466  | 0.204  | 0.122  | 0  | 
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
技术小提示:
1. 当混合或重溶蛋白溶液时,尽量避免起沫。
2. 为了避免交叉感染,配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。
3. 每次孵育时,请正确使用封板胶可保证结果的准确性。
4. 混合后的显色底物在上板前应为无色,请避光保存;加入微孔板后,将由无色变成不同深度的蓝色。
5. 终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致;加入终止液后,孔内颜色由蓝变黄;若孔内有绿色,则表明孔内液体未混匀;请充分混合。
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