D283 Med（人脑髓母细胞瘤细胞）
| 一、细胞基本属性 |
细胞名称 | D283 Med（人脑髓母细胞瘤细胞） |
细胞别称 | D283 MED; D283-MED; D-283 Med; D-283MED; D283MED; D283Med; D283-Med; D283; Med 283; H283 |
商品货号 | YB-71271HC |
种属来源 | 人 |
年龄性别 | 男；6岁 |
组织来源 | 脑组织 |
生长特性 | 悬浮生长，聚团，少数贴壁 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
背景简介 | D283 Med细胞是由Friedman等人于1985年建系，源自一名6岁患有神经管细胞瘤有腹腔转移的白人男性小孩的腹水细胞。 |
生物安全等级 | 1 |
细胞规格 | 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
支原体检测 | 无 |
基因表达情况 | The cells produce tumors in nude mice and the resulting tumors are glutamine synthetase positive; neuron specific enolase positive; glial fibrillary acidic proteins negative; S100 (S-100) protein negative; The cells express elevated levels of four biochemical markers of SCLC (neuron specific enolase; the brain isoenzyme of creatine kinase; L-DOPA decarboxylase; bombesin-like immunoreactivity) |
保藏机构 | ATCC; HTB-185IZSLER; BS TCL 203KCB; KCB 2010201YJ |
培养基 | MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/S |
培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
冻存条件 | 无血清冻存液，液氮储存 |
倍增时间 | ~52 hours |
STR鉴定位点 | Amelogenin：X,Y；CSF1PO：9,12；D2S1338：17,23；D3S1358：15；D5S818：11；D7S820：9,10；D8S1179：11,12,13；D13S317：8,10；D16S539：11；D18S51：16,18；D19S433：13,14；D21S11：28,30.2；FGA：20,23；PentaD：9,13；PentaE：7,10；TH01：7；TPOX：8,11；vWA：16,8；D6S1043：12,13；D12S391：19,22；D2S441：11； |
二、细胞培养操作
1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
b、加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
c、按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。
9. 注意： 1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
关键字： D283 Med;人脑髓母细胞瘤细胞;
上海钰博生物科技有限公司是2012年5月由“海归”组成的创业团队与两个专业投资机构发起成立的，以
开发生产科研试剂和特色检验产品为方向，经过两年多的努力，已经建立了免疫学和分子生物学的五个技术平台，开发了ELISA/ELISpot酶联免疫试剂盒、重组蛋白、荧光标记抗体、四聚体(Tetramer)特异性T细胞检测试剂盒、Aimplex流式高通量多因子检测、microRNA表达谱分析和功能研究等系列产品和服务，与国内外免疫学、干细胞、传染病和肿瘤研究及临床检验领域的科学家们建立了良好的合作关系，形成了一定的品牌影响力。钰博生物另建有七大技术服务平台（ELISA定制服务，免疫学检测服务、分子生物学技术服务、蛋白表达与纯化技术服务、抗体制备技术服务、细胞培养技术服务、整体实验课题服务。用专业的知识、专业的设备、专业的态度为客户提供一站式实验技术服务！