漆酶（Laccase）试剂盒说明书
微量法100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，
具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常
广泛的应用。
测定原理：
漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由
基的增加速率，可计算得漆酶活性。
自备仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml
提取液），进行冰浴匀浆。12000g4℃离心30min，取上清，置冰上待测。
2、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入
1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g
离心10min，取上清置于冰上待测。
3、细胞培养液：直接检测。
注意事项
1、极少数样本在60℃水浴20min后会出现沉淀，可经过8000g25℃离心10min后，取上清检测，例
如成熟的水稻叶片样本。
2、为确保检测准确性，若ΔA大于1，将样本用提取液稀释2~10倍后重新检测，计算公式乘以相应
稀释倍数。
酶活性计算公式：
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min/mgprot）=×V反总÷（V样×Cpr）÷T=9.26×△A÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min/g鲜重）=×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T=9.26×△A÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min/104cell）=×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T=9.26×△A÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min/L）=×V反总÷V样÷T=9260×△A
ε：ABTS毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.3ml；V
样：反应体系中样本体积，0.03ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，
样本质量，g；T：反应时间，20min
b.用96孔板测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min/mgprot）=×V反总÷（V样×Cpr）÷T=18.52×△A÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min/g鲜重）=×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T=18.52×△A÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min/104cell）=×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T
=18.52×△A÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min/L）=×V反总÷V样÷T=18520×△A
ε：ABTS毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.3ml；V
样：反应中样本体积，0.045ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本
质量，g；T：反应时间，20min。
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伊势久（江苏连云港）生物科技有限责任公司，成立于2019年，坐落于新亚欧大陆桥东方桥头堡连云港市。公司由资深行业专家和双一流高校博士联合创办，主要从事生化检测、病理检测和原料酶等相关试剂的研发和生产。
我司位于联东U谷科技创新谷内的2000平米的生产、研发基地已建成投入运行，其中包括150平米的超十万级的洁净车间。我司坚持以自主研发为核心，现已生产出的脲酶、tRNA转运核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制剂等产品，热销市场以来收到了客户的广泛好评。
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