黄嘌呤氧化酶（xanthione oxidase, XOD）试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
XOD（EC 1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心，肺，肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。
测定原理：
XOD催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。
试剂组成和配制：
产品名称 | OX004-100T/96S | Storage |
提取液：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 30ml | 4℃ |
试剂二：粉剂 | 2瓶 | 4℃ |
试剂三：液体 | 2ml | 4℃ |
说明书 | 一份 |
需自备仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。
XOD检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二先加入0.42ml试剂三确保溶解混匀后，再加入试剂一定容至15ml，充分混匀，现配现用。
测定前将XOD检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
准备96孔UV板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。
5、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μl样本和200μl工作液，立即混匀并计时，记录290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
XOD活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）XOD计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=1721×ΔA
2、组织、细菌或细胞中XOD计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T =1721×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W ×V样÷V样总）÷T=1721×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（500×V样÷V样总）÷T=3.44×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.1×10-4 L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×104 L/ mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；500：细胞或细菌总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下的回归曲线为y = 0.0063x，R2 = 0.9977；其中y为△A，x为尿酸浓度nmol/ml
1、血清（浆）XOD计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/ml）＝（ΔA÷0.0063）×V反总÷V样÷T
2、组织、细菌或细胞中XOD计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/mg prot）＝（ΔA÷0.0063）×V反总÷(V样×Cpr)÷T
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/g 鲜重）＝（ΔA÷0.0063）×V反总÷（W ×V样÷V样总）÷T
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/104 cell）=（ΔA÷0.0063）×V反总÷（500×V样÷V样总）÷T
V反总：反应体系总体积，2.1×10-4 L；V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；500：细胞或细菌总数，500万。
关键字： 黄嘌呤氧化酶（XOD）检测试剂盒;
伊势久（江苏连云港）生物科技有限责任公司，成立于2019年，坐落于新亚欧大陆桥东方桥头堡连云港市。公司由资深行业专家和双一流高校博士联合创办，主要从事生化检测、病理检测和原料酶等相关试剂的研发和生产。
我司位于联东U谷科技创新谷内的2000平米的生产、研发基地已建成投入运行，其中包括150平米的超十万级的洁净车间。我司坚持以自主研发为核心，现已生产出的脲酶、tRNA转运核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制剂等产品，热销市场以来收到了客户的广泛好评。
公司秉承“ 挚诚科研、匠心传承” 的发展理念，聚焦于前沿生物技术的应用和创新，努力成为生物科技领域的标杆企业。坚持以客户为中心，致力于为中国的科研工作者提供高品质的产品和专业服务，始终是我们努力的目标和方向。