二胺氧化酶（DiamineOxidase，DAO）试剂盒说明书
微量法100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为
醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
测定原理：
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺
生成氧化型邻联茴香胺，在460nm处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算DAO活性。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml
提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细
胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，
4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3、血清等液体：直接测定
混匀，37℃水浴30min，微量石英比色皿/96孔板，蒸馏水调零，测定460nm吸光值。ΔA=A测定-A
对照。
酶活性计算公式：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmolH2O2所需的酶
量为一个酶活力单位（U）。
DAO活性（nmol/min/mgprot）=×V反总÷（V样×Cpr）÷T=18×A460÷Cpr
（2）按样本质量计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每克组织每分钟催化产生1nmolH2O2所需的酶量定义
为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/g鲜重）=×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T=18×A460÷W
（3）按细胞数量计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每104个细胞每分钟催化产生1nmolH2O2所需的酶量
定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/104cell）=×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T=18×A460÷细胞数量
(4)按液体体积计算
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生1nmolH2O2所需的酶量定
义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/ml）=×V反总÷V样÷T=18×A460
ε：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，
0.2ml；V样：反应中样本体积，0.05ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；
W：样本质量，g；T：反应时间，30min
b.用96孔板测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmolH2O2所需的酶
量为一个酶活力单位（U）。
DAO活性（nmol/min/mgprot）=×V反总÷（V样×Cpr）÷T=36×A460÷Cpr
（2）按样本质量计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每克组织每分钟催化产生1nmolH2O2所需的酶量定义
为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/g鲜重）=×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T=36×A460÷W
（3）按细胞数量计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每104个细胞每分钟催化产生1nmolH2O2所需的酶量
定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/104cell）=×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T=36×A460÷细胞数量
(4)按液体体积计算
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生1nmolH2O2所需的酶量定
义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/ml）=×V反总÷V样÷T=36×A460
ε：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5L/mmol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V反总：反应总体
积，0.2ml；V样：反应中样本体积，0.05ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；
W：样本质量，g；T：反应时间，30min。
注意事项：
1、如果OD值小于0.01，适当加大提取用样本量；OD值大于0.8，粗酶液可适当稀释，或者减少提
取用样本量。
2、样品蛋白质含量需要另外测定。
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