【产品名称】
商品名称：猪圆环病毒II型PCR检测试剂盒
【包装规格】25T/盒、50T/盒
【检验原理】本试剂盒采用TaqMan 探针法实时荧光PCR 技术，根据猪圆环病毒II型基因设计特异性引物和荧光探针，用荧光PCR技术对猪圆环病毒II型的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染病料的病原学诊断。
【试剂组成】
包装规格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
PCR反应液 | 500 μL×1管 | 1000 μL×1管 |
阳性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
阴性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
说明书 | 1份 | 1份 |
说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用
【储存条件及有效期】
避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】 ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【产品展示】
【检验方法】
1. 试剂准备（试剂准备区）
（1）从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数
单反液配制表(每份) | PCR反应液（UNG酶及Taq酶） | 20 μL |
（3）在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。
（4）盖紧PCR反应管盖后将PCR反应管转移至样本处理区。剩余试剂放回-20℃以下冰箱冷冻保存。
2.样本准备（样本处理区）
用DNA/RNA提取试剂盒提取核酸即可，具体操作按照其试剂盒说明书
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本DNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。
4.PCR（PCR扩增区）
（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。
（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。
反应体积 | 25 μL | 通道选择 | FAM通道采集布鲁氏菌荧光信号 |
PCR 反应 条件 | 步骤 | 条件 | 循环数 |
UNG处理 | 37℃：2分钟（min） | 1 |
预变性 | 95℃：3分钟（min） | 1 |
PCR扩增 | 95℃：5秒（s） | 40 |
55℃：40秒（s） （此阶段结束时采集荧光信号） |
注：ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正，设置淬灭基团选择None。
【注意事项】
1.使用本试剂盒的实验室，应严格按照国家有关部分颁布的有关基因扩增检验实验室管理规范进行管理；
2.为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理；
3.各区域物品均为专用，不得交叉使用，以免污染；检测结束后，应立即对工作台清洁；
4.吸取反应液时，应尽量避免产生气泡；上 PCR 仪前，应注意检查各反应管是否盖紧，以免液体蒸发造成结果不准确；
5.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心；
6.试剂盒内所配阴性和阳性对照在第一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放；
7.为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记；
8.检测过程中使用过的吸头，应直接打到盛有 10%次氯酸的废物缸内，检测结束的PCR 反应管，切忌开盖，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃；工作台及各种实验用品应定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外灯进行消毒；
9.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用；并在有效期内使用。
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