小鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清液或其他生物液体中的MMP-9含量，仅供科研使用，不适用于临床诊断。

实验原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法：

抗小鼠MMP-9抗体预包被于酶标板；

加入样本或标准品，MMP-9与包被抗体结合；

依次加入生物素化检测抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，形成“抗体-抗原-抗体-酶”复合物；

洗涤后加入TMB显色底物，在HRP催化下产生蓝色产物，终止液（酸性）作用后转为黄色；

450 nm波长下测定OD值，MMP-9浓度与OD值呈正相关，通过标准曲线计算样本浓度。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（96T） | 备注 |

| 预包被酶标板 | 96孔（12条×8孔） | 可拆卸 |

| 重组MMP-9标准品 | 冻干粉×2瓶 | 临用前用样本稀释液复溶至1 ml，浓度梯度：1,000、500、250、125、62.5、31.25、15.625 pg/ml（空白为0 pg/ml） |

| 生物素化检测抗体 | 1.2 ml | 需按说明书稀释 |

| HRP标记亲和素 | 1.2 ml | 即用型 |

| 显色液（TMB A/B） | 各6 ml | 避光保存，临用前按1:1混合 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 6 ml | 避免接触皮肤 |

| 20×浓缩洗涤液 | 25 ml | 使用前用蒸馏水稀释至1× |

| 样本稀释液 | 6 ml | 用于标准品及样本稀释 |

需自备器材

酶标仪（450 nm滤光片）

精密移液器（1 μl–1 ml）及一次性吸头

37℃恒温孵育箱

蒸馏水或去离子水

吸水纸、计时器

操作步骤

试剂准备：

标准品复溶：取1 ml样本稀释液加入冻干标准品，静置10分钟混匀，梯度稀释。

洗涤液配制：20×浓缩液按1:19稀释。

加样与孵育：

标准品孔：加入50 μl各浓度标准品；

样本孔：先加10 μl样本，再加40 μl稀释液（5倍稀释）；

空白孔：仅加样本稀释液。

37℃孵育60分钟，洗涤5次。

检测抗体与酶结合：

每孔加入生物素化抗体50 μl，37℃孵育30分钟，洗涤5次；

加入HRP标记亲和素50 μl，避光孵育10分钟，洗涤5次。

显色与终止：

每孔加入TMB混合液90 μl，避光显色15分钟；

加入终止液50 μl，30分钟内测定OD450值。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐四参数拟合）；

样本浓度=标准曲线对应值×稀释倍数（若超出检测范围需进一步稀释）。

检测范围：15.625–1,000 pg/ml

灵敏度：<10 pg/ml

批内变异系数：<10%；批间变异系数：<15%

注意事项

避免反复冻融样本，离心去除沉淀；

不同批次试剂不可混用；

TMB显色时间需严格控制，避免强光照射；

终止后若出现沉淀属正常现象，不影响结果。

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