CY5-TSA/CY5-酪氨酰胺/CY5-TSA / TSA-CY5/Tyramide-Cyanine5 conjugate/近红外荧光信号放大探针
CY5-TSA的核心结构由两部分组成:作为荧光报告基团的CY5染料和作为生物活性部分的酪胺(Tyramide)12。CY5是一种性能优异的远红/近红外荧光染料,其最大吸收波长(λ_ex)约为645-651 nm,最大发射波长(λ_em)约为662-670 nm256。这种长波长的光具有更强的组织穿透能力,并能有效减少生物样本自发荧光的干扰,从而获得高信噪比的成像效果2。酪胺基团是过氧化物酶(如辣根过氧化物酶HRP)的底物114。TSA技术的工作原理主要分为以下几个步骤14:
1.酶促激活:首先,靶标分子(如抗原)通过一抗与辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗结合。在过氧化氢(H₂O₂)存在的条件下,HRP会催化CY5-TSA中的酪胺分子,使其氧化生成高反应性的自由基中间体。
2.共价沉积:这些高活性的自由基能够迅速且共价地结合到靶标分子附近的酪氨酸残基上。由于每个HRP分子在短时间内可以催化产生大量酪胺自由基,从而在目标抗原位点局部沉积大量的CY5荧光染料分子。
3.信号放大:这种局部的沉积效应实现了信号的极大增强,其检测灵敏度相比传统的免疫荧光方法(如直接或间接法)可提升10至100倍,甚至更高,使得检测极低丰度的靶标成为可能。
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