海藻糖酶(THL)试剂盒说明书
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
THL(EC 3.2.1.28)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供应。
测定原理:
THL催化海藻糖产生葡萄糖,葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰,以此反映THL活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样品测定的准备:
1、细菌或细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3S,间隔10S,重复30次);8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织的处理:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(ml):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议取0.1ml血清(浆)加入1ml提取液),冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
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