糖原含量试剂盒说明书
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖,是糖的主要的储存形式之一,主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量,分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度,当血糖升高时可在肝脏合成糖原,血糖降低时,肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此,肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时,肌糖原不能直接分解成血糖,必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。
测定原理:
蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原,在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。
糖原提取:
1﹑细胞或细菌:收集500~1000万细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;加入0.75ml提取液超声波破碎细菌或细胞(功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);转移至10ml试管中,95℃水浴20min(盖紧,防止水分散失),隔5min振摇试管1次,使充分混匀;取出试管冷却后,用蒸馏水定容到5ml,混匀,8000g 25℃离心10min,取上清液待测。
2﹑组织:称取0.1~0.2g样品,加入0.75ml提取液充分匀浆;转移至10ml试管中;95℃水浴20min(盖紧,防止水分散失),隔5min振摇试管1次,使充分混匀;待组织全部溶解后,取出试管冷却后,用蒸馏水定容到5ml,混匀,8000g 25℃离心10min,取上清液待测。
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