多肽肽库/多肽阵列芯片筛选/多肽靶向肽筛选/蛋白互作方案设计

多肽阵列芯片是将大量多肽固定在固相载体（如玻璃、硅片、硝酸纤维素膜）上，通过与目标分子（蛋白、抗体、细胞）的结合反应，实现高通量筛选，核心优势是 “一次实验筛选数千条多肽”。

靶向肽筛选是在肽库初筛基础上，通过多轮验证（结合活性、特异性、功能活性），获得能特异性结合目标分子 / 细胞的功能肽，核心是 “排除假阳性，确认功能相关性”。

蛋白互作研究需结合多肽筛选结果，进一步明确结合位点、作用方式及互作对蛋白功能的影响，常用技术可分为 “体外验证” 和 “体内验证” 两类。

1. 方案设计逻辑
明确研究目标 → 选择肽库类型（如未知靶点选随机肽库，已知蛋白选重叠肽库） → 高通量初筛（阵列芯片 / 噬菌体筛选） → 特异性与亲和力复筛（SPR/ELISA） → 功能验证（细胞 / 体内实验） → 蛋白互作机制解析（Co-IP/SPR mapping）。
2. 应用场景示例：筛选靶向肿瘤细胞的穿膜肽
目标：获得能特异性结合肺癌 A549 细胞并穿透细胞膜的肽；
肽库选择：随机 12 肽噬菌体展示库（库容量 10¹¹）；
初筛：用 A549 细胞进行 3 轮 “吸附 - 洗脱 - 扩增” 筛选，获得 50 条候选肽；
复筛：
特异性：检测候选肽与正常肺上皮细胞 BEAS-2B 的结合率（排除非特异性）；
穿膜性：荧光标记候选肽，共聚焦观察 A549 细胞内荧光强度；
互作验证：
Pull-down 捕获 A549 细胞中与候选肽结合的蛋白，质谱鉴定靶点（如某膜蛋白）；
Co-IP 验证候选肽与靶点蛋白在细胞内的互作；
体内验证：裸鼠 A549 肿瘤模型注射荧光标记肽，活体成像观察肿瘤组织富集情况。